[发明专利]一种检测布鲁氏菌的LAMP引物及包含该引物的试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测布鲁氏菌的LAMP引物，其特征在于，所述LAMP引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的正向内引物FIP、核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的反向内引物BIP、核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示的正向外引物F3以及核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的反向外引物B3。 

2.根据权利要求1所述的用于检测布鲁氏菌的LAMP引物，其特征在于，所述LAMP引物还包括核苷酸序列分别如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的环引物LF1和LB1，或者核苷酸序列分别如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的环引物LF2和LB2。 

3.一种用于检测布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1或2所述的LAMP引物、Bst DNA聚合酶、含dNTPs的反应缓冲液和去离子水; 

其中，所述含dNTPs的反应缓冲液包含40mM pH8.8的Tris-HCl、20mM KCl、20mM(NH₄)₂SO₄、16mM MgSO₄、0.2%吐温20、1.6M甜菜碱以及2.8mM dNTPs。 

4.根据权利要求3所述的用于检测布鲁氏菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括40pM/μL引物FIP100μL，40pM/μL引物BIP100μL，5pM/μL引物F3100μL，5pM/μL引物B3100μL，20pM/μL引物LF1或LF2100μL，20pM/μL引物LB1或LB2100μL，8U/μL的Bst DNA 聚合酶100μL，含dNTPs的反应缓冲液1.5mL，去离子水1mL。 

5.一种检测布鲁氏菌的方法，其特征在于，包括如下步骤： 

S01：制备模板DNA； 

S02：以S01中所得的DNA作为模板，采用权利要求1或2所述的LAMP引物，于60℃～65℃进行LAMP扩增反应，反应时间为55min～90min；所述LAMP扩增反应的体系为25μL，各组分的含量如下： 

或者 

S03:扩增结果判定。 

6.根据权利要求5所述的检测布鲁氏菌的方法，其特征在于，所述步骤S02中，利用Real-time turbidimeter浊度仪进行LAMP扩增反应；通过浊度仪连接的LA-320程序显示的浊度上升时间鉴定所述步骤S02中特异性扩增产物的存在。 

7.根据权利要求5或6所述的检测布鲁氏菌的方法，其特征在于，所述步骤S02中，所述LAMP扩增反应的温度为63℃，时间为90min。 

8.根据权利要求5-7任一所述的检测布鲁氏菌的方法，其特征在于，所述布鲁氏菌为人体血液或者牛奶中的布鲁氏菌。 

9.一种利用权利要求3或4所述的试剂盒在检测布鲁氏菌中的应用。 

10.一种利用权利要求1或2所述的LAMP引物在检测布鲁氏菌中的应用。