[发明专利]一种基于特异引物鉴定5种常见储粮扁谷盗的试剂盒

权利要求书

1.一种用于鉴定或辅助鉴定储粮扁谷盗的试剂盒，包括如下5个引物对中的至少一对：

（1）由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1；

（2）由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2；

（3）由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的引物对3；

（4）由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成的引物对4；

（5）由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成的引物对5。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中组成每个引物对的两条单链DNA的摩尔数相等。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述储粮扁谷盗为如下中的至少一种：锈赤扁谷盗、长角扁谷盗、微扁谷盗、土耳其扁谷盗和开普扁谷盗。

4.权利要求1-3中任一所述试剂盒的制备方法，包括如下步骤：将组成所述试剂盒中各引物对的各单链DNA分别单独包装后，与下述物质中的至少一种包装在同一试剂盒内：PCR反应缓冲液、DNA聚合酶和4种dNTP。

5.鉴定或辅助鉴定储粮扁谷盗的方法，为如下（a）-（e）中的任一种：

（a）鉴定或辅助鉴定待测储粮扁谷盗是否为锈赤扁谷盗的方法，包括如下（a1）和（a2）的步骤：

（a1）以所述待测储粮扁谷盗的基因组DNA为模板，用由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA组成的引物对1进行PCR扩增；

（a2）检测步骤（a1）得到的PCR产物的大小，按照如下方法根据PCR产物确定所述待测储粮扁谷盗是否为锈赤扁谷盗：若所述PCR产物中含有158bp的DNA片段，则所述待测储粮扁谷盗为或候选为锈赤扁谷盗；反之，则所述待测储粮扁谷盗不为或候选不为锈赤扁谷盗；

（b）鉴定或辅助鉴定待测储粮扁谷盗是否为长角扁谷盗的方法，包括如下（b1）和（b2）的步骤：

（b1）以所述待测储粮扁谷盗的基因组DNA为模板，用由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA组成的引物对2进行PCR扩增；

（b2）检测步骤（b1）得到的PCR产物的大小，按照如下方法根据PCR产物确定所述待测储粮扁谷盗是否为长角扁谷盗：若所述PCR产物中含有371bp的DNA片段，则所述待测储粮扁谷盗为或候选为长角扁谷盗；反之，则所述待测储粮扁谷盗不为或候选不为长角扁谷盗；

（c）鉴定或辅助鉴定待测储粮扁谷盗是否为微扁谷盗的方法，包括如下（c1）和（c2）的步骤：

（c1）以所述待测储粮扁谷盗的基因组DNA为模板，用由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成的引物对3进行PCR扩增；

（c2）检测步骤（c1）得到的PCR产物的大小，按照如下方法根据PCR产物确定所述待测储粮扁谷盗是否为微扁谷盗：若所述PCR产物中含有585bp的DNA片段，则所述待测储粮扁谷盗为或候选为微扁谷盗；反之，则所述待测储粮扁谷盗不为或候选不为微扁谷盗；

（d）鉴定或辅助鉴定待测储粮扁谷盗是否为土耳其扁谷盗的方法，包括如下（d1）和（d2）的步骤：

（d1）以所述待测储粮扁谷盗的基因组DNA为模板，用由序列表中序列7和序列8所示的两条单链DNA组成的引物对4进行PCR扩增；

（d2）检测步骤（d1）得到的PCR产物的大小，按照如下方法根据PCR产物确定所述待测储粮扁谷盗是否为土耳其扁谷盗：若所述PCR产物中含有355bp的DNA片段，则所述待测储粮扁谷盗为或候选为土耳其扁谷盗；反之，则所述待测储粮扁谷盗不为或候选不为土耳其扁谷盗；

（e）鉴定或辅助鉴定待测储粮扁谷盗是否为开普扁谷盗的方法，包括如下（e1）和（e2）的步骤：

（e1）以所述待测储粮扁谷盗的基因组DNA为模板，用由序列表中序列9和序列10所示的两条单链DNA组成的引物对5进行PCR扩增；

（e2）检测步骤（e1）得到的PCR产物的大小，按照如下方法根据PCR产物确定所述待测储粮扁谷盗是否为开普扁谷盗：若所述PCR产物中含有289bp的DNA片段，则所述待测储粮扁谷盗为或候选为开普扁谷盗；反之，则所述待测储粮扁谷盗不为或候选不为开普扁谷盗。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤（a）-步骤（e）中，所有的所述进行PCR扩增的退火温度均为50℃。