[发明专利]用于三聚氰胺残留免疫分析的人工抗原和抗体及其制备方法

权利要求书

1.用于三聚氰胺残留免疫分析的人工抗原，其特征在于选择了具有氨基苯环结构的4，6-二氨基-1，3，5-三嗪-2-乙酸为半抗原，其分子量为169，结构式为                                               

将半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA）或卵清蛋白（OVA）相连接，合成人工抗原。

2.根据权利要求1所述的用于三聚氰胺残留免疫分析的人工抗原的制备方法，其特征在于用下述步骤制得：

免疫抗原和包被抗原的合成：

用半抗原4，6-二氨基-1，3，5-三嗪-2-乙酸，采用活性酯法（NHS-DCC法）将半抗原与载体蛋白相偶联，制备三聚氰胺人工抗原和包被原，具体做法是：

将41.5-42.5mg半抗原、33.5-34.5mg NHS、61.5-62.5mg DCC加入2mL的DMF，在4℃环境下搅拌过夜；次日将混合物离心，弃去沉淀，吸取上清液备用；将112.5-113.0mg BSA、74.5-75.0mg OVA分别溶于8mL 0.01mol/L，pH=7.4的PBS，将所得的上清液分成两份边搅拌边各自缓慢地加入上述两种溶液，4℃缓慢搅拌过夜；后将反应液转移至处理好的透析袋中，在PBS中彻底透析后收集，分装，-20℃保存。

3.用于三聚氰胺残留免疫分析的人工抗体，其特征在于采用4，6-二氨基-1，3，5-三嗪-2-乙酸与载体蛋白BSA相连接合成的人工抗原，经免疫动物后采血，分离抗血清后纯化制得。

4.根据权利要求3所述的用于三聚氰胺残留免疫分析的人工抗体的制备方法，其特征在于用下述步骤制得：

免疫动物选用体重1.5公斤左右新西兰大白兔，采用背部皮内多点注射法免疫，初免后进行三次加强免疫，分别于初次免疫后2周、4周、6周免疫三次，此后间隔一个月加强免疫一次；

初次免疫时取2mg本发明的免疫抗原溶于2mL生理盐水与等量的弗氏完全佐剂充分混合乳化，进行动物免疫；

加强免疫时取1.5mg本发明的免疫抗原溶于2mL生理盐水与等量的弗氏不完全佐剂充分混合乳化，进行动物免疫；

从第3次免疫开始，于每次加强免疫后10 d进行耳静脉采血，定时监测抗体效价，当抗血清效价达到较高水平时最后加强免疫一次，第7～10天后颈动脉采全血，收集血清，用饱和硫酸铵法对抗血清进行纯化，即制得抗体，于-20℃保存备用。