[发明专利]一种超声技术提取牛肝菌中β-葡聚糖的方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种从菌类中提起有效成分的方法，尤其涉及一种超声技术提取牛肝菌中β-葡聚糖的方法。 

背景技术

    研究表明：β-葡聚糖是牛肝菌中重要的天然活性成分，β-葡聚糖能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等，从而提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体的含量，全面刺激机体的免疫系统。大量实验表明，β-葡聚糖可促进体内IgM抗体的产生，以提高体液的免疫能力。此外，β-葡聚糖尚有清除游离基、抗辐射、溶解胆固醇，预防高脂血症及抵抗滤过性病毒、真菌、细菌等引起的感染等作用。因而β-葡聚糖的提取研究备受关注，牛肝菌中含有丰富的β-葡聚糖成分，但现有技术中还没有利用超声技术从牛肝菌中提取β-葡聚糖的方法。 

发明内容

所要解决的技术问题：针对以上问题本发明提供了一种超声技术提取牛肝菌中β-葡聚糖的方法。 

技术方案：为了解决以上问题本发明提供了一种超声技术提取牛肝菌中β-葡聚糖的方法。其特征在于：包括以下步骤： 

步骤一：将牛肝菌洗净、烘干，称干重；

步骤二：将步骤一处理好的牛肝菌切成碎末，放进研钵中，倒入少量液氮，迅速研磨；

步骤三：将步骤二得到的牛肝菌研磨样品配成料液比是1:10—1:30的溶液；

步骤四：在步骤三中得到的稀释液中倒入60%—90%的乙醇溶液，摇匀后萃取3h—6h，制得萃取液；

步骤五：将步骤四得到的萃取液进行离心，得到上清液，离心的条件是2000r/min-3500 r/min、10min-25min；

步骤六：选择截留分子量10万的超滤膜对步骤四中得到的上清液进行超滤，取过滤液；

步骤七：将步骤七得到的过滤液进行的超声提取，超声波的条件是：超声频率40W—120W：时间10min-20min；

步骤八：将步骤七所得的过滤液定容于250ml容量瓶，将β-葡聚糖稀释液放置于不同温度的水槽中提取一定时间，水槽温度是40℃—100℃，提取时间：2h—5h；

步骤九：分别精密吸取上述葡萄糖对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、mL至6个25 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1.0 mL于试管中，于冰水浴条件下缓慢加入6%苯酚溶液1.0 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸溶液2.0 mL，摇匀，冷却，同时以苯酚-浓硫酸溶液作为空白对照，在 490 nm处测量其吸光度值，以葡萄糖的质量浓度(ρ)为横坐标,溶液的吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，经回归分析，得标准曲线方程：A=13.154ρ+0.0158，r=0.998 1，葡萄糖的质量浓度在0.01～0.15 mg·mL-1范围内与吸光度线性关系良好；

步骤十：取1mlβ-葡聚糖稀释液，加入6%苯酚溶液1ml，浓硫酸2ml，摇匀，冷却，于490nm波长中测吸光度A。 

本发明具有以下优点： 

1、 本发明将除了利用超声技术进行提取，还结合了液氮研磨和超滤技术，大大提高了β-葡聚糖提取率和产品纯度含量；

2、 本发明工艺流程适合工业化大规模生产。

步骤二所述的液氮研磨方法既能使各种组织成分不易被破坏或降解,又能使组织变硬,脆性增加易于磨碎，使细胞内的物质释放出来。 

步骤三所述的溶液料液比取1:15。此料液比能够使牛肝菌粉末充分溶解。 

步骤四所述的乙醇溶液浓度取70%，萃取时间取4h。此条件下能够充分提取β-葡聚糖。 

步骤五所述的离心条件是3000r/min,15min。此条件下的离心能让β-葡聚糖充分进入上清液。 

步骤七所述的超声条件是80W, 15min。此条件下能够使得牛肝菌细胞充分破裂，使得细胞内组分充分释放，又不会破坏细胞内的β-葡聚糖成分 

 步骤八所述的水槽温度是60℃，提取时间为3h。此条件下能充分提取牛肝菌中的β-葡聚糖。

  

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明做进一步的详细描述。 

本发明所述的一种超声技术提取牛肝菌中β-葡聚糖的方法，包括以下步骤： 

步骤一：将牛肝菌洗净、烘干，称干重；

步骤二：将步骤一处理好的牛肝菌切成碎末，放进研钵中，倒入少量液氮，迅速研磨；

步骤三：将步骤二得到的牛肝菌研磨样品配成料液比是1:10—1:30的溶液；