[发明专利]一种富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种具有保健功能和药用价值的富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法，其特征在于：

(1).海藻培养液的配制：使用海水、碱金属无机盐、有机酸铁、维生素来制备培养液；

(2).富硒海藻的制备：将Na₂SeO₃加入到步骤(1)制得的培养液中，将处于对数生长期的海藻接种于所述培养液中培养，得到富硒海藻；

(3).富硒马氏珠母贝的喂养：向步骤(2)得到的富硒海藻中加入FeCl₃进行沉淀，离心后分离固体，冷冻干燥制成藻粉，喂食马氏珠母贝，得到富硒马氏珠母贝；

(4).蛋白提取液的配制：使用缓冲液、乙二胺四乙酸(EDTA)、二硫苏糖醇(DTT)、苯甲基磺酰氯(PMSF)配制成蛋白提取液；

(5).蛋白质的提取：将步骤(3)得到的富硒马氏珠母贝清洗取肉后，送入搅拌机搅碎；加入步骤(4)的蛋白提取液，静置提取，然后离心分离，收集粗蛋白上清液，加入(NH₄)₂SO₄至饱和，静置沉淀，离心分离，所得沉淀再次用步骤(4)的提取液溶解，使用截流量为8000-14000Da的透析袋进行透析，收集透析袋内上清液，冷冻干燥，得到富硒蛋白。

2.根据权利1所述的一种具有保健功能和药用价值的富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法，其特征在于：

所述步骤(1)中，所述碱金属无机盐选自硝酸钠、碳酸钠、硝酸钾、碳酸钾、硫酸钠、硫酸钾、氯化钠、氯化钾、磷酸钠、磷酸钾、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾中的任意一种或多种的组合；所述有机酸铁盐选自柠檬酸铁、甲酸铁、草酸铁、草酸亚铁中的任意一种或多种的组合；所述维生素选自维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B3、维生素B4、维生素B5、维生素B7、维生素B9、维生素B12、维生素H、维生素P、维生素K、维生素E中的任意一种或多种的组合。

3.根据权利1或2所述的一种具有保健功能和药用价值的富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法，其特征在于：

所述步骤(1)中，所述碱金属无机盐为硝酸钠、碳酸钠和磷酸氢二钾中的任意一种或多种，所述有机酸铁盐为柠檬酸铁，所述维生素为维生素B1或维生素B12。

4.根据权利要求1-3任一项所述的一种具有保健功能和药用价值的富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法，其特征在于：

所述步骤(2)中，海藻为扁藻、硅藻、金藻或叉鞭藻，在培养期间的光照强度为3000-5000lux，光照周期为明期(L)：暗期(D)=9-16:8-15，培养时间为3-7天，每隔4-6小时搅拌一次。

5.根据权利要求1-4任一项所述的一种具有保健功能和药用价值的富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法，其特征在于：

所述步骤(2)中，所述在步骤(1)制得的培养液中，Se的浓度为1-50mg/L，培养温度为25±5℃。

6.根据权利要求1-5任一项所述的一种具有保健功能和药用价值的富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法，其特征在于：

所述步骤(3)中，向步骤(2)得到的富硒海藻中加入FeCl₃，其质量加入量相对于步骤(1)的培养液中所用的海水体积为0.5-3g/L，在喂食马氏珠母贝时，冷冻干燥后的藻粉投入量为1-5g/L，投喂时间为5-20天。

7.根据权利要求1-6任一项所述的一种具有保健功能和药用价值的富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法，其特征在于：

所述步骤（4)中，所述蛋白提取液由pH7.4-8.5的缓冲液、pH7.4-8.5的EDTA水溶液、DTT和PMSF组成。

8.根据权利要求7所述的一种具有保健功能和药用价值的富硒马氏珠母贝蛋白的制备方法，其特征在于：

所述步骤(4)中，所述蛋白提取液中缓冲液为Tris-HCl缓冲液，蛋白质提取液的各组分浓度如下：

Tris-HCl缓冲液   15-50mmol/L

EDTA   1mmol/L

DTT   2mmol/L

PMSF   1mmol/L。