[发明专利]利用非标记功能核酸形成G-四联体荧光法检测铅的方法

权利要求书

1.一种利用非标记功能核酸形成G-四联体荧光法检测铅的方法，其特征在于，通过功能核酸以及DNA嵌入剂构建铅离子检测体系；当检测体系中没有铅离子时，DNA嵌入剂嵌入到功能核酸中，在535nm处释放出荧光；当检测体系中加入铅离子后，铅离子促进功能核酸形成G-四联体结构，DNA嵌入剂再与G-四联体作用并抑制535nm处的荧光释放，基于释放出的荧光信号与铅离子浓度呈反比，则通过确定荧光信号实现铅离子的定量检测。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的功能核酸的序列如Seq ID No.1所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的DNA嵌入剂为市售SYBR Green I，其初始浓度为10000×。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的铅离子检测体系采用以下方式构建：

1)在2mL刻度离心管中，加入5μL浓度为5μM的功能核酸母液，补加去离子水至445μL，充分混匀后再将离心管置于25°C条件下备用；

2)取16支包含按步骤1)方法制备的由功能核酸形成检测体系混合液的离心管，分别加入50μL不同浓度铅标准液，使得整个检测体系中的铅含量维持在0.5–600ppb，充分混匀后再将离心管置于25°C条件下孵育10min后，加入400×DNA嵌入剂母液5μL，25°C条件下避光孵育10min后，留作以下测定用；

3)另取1支包含按步骤1)方法制备的由功能核酸形成检测体系混合液离心管，加入50μL超纯水，按步骤2)方法处理后作为空白对照体系溶液；

4)分别取500μL步骤2)和步骤3)制备的标准溶液和空白对照液，用荧光光度计进行扫描测定信号，并以步骤2）中不同浓度铅(C_Pb)与对应的相对荧光强度Q作图，绘制标准曲线。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征是，所述的标准溶液和空白对照液分别置于内径为0.5cm×0.5cm，外径为1.0cm×1.0cm的石英荧光用比色皿中进行扫描测定。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征是，所述的扫描是指：激发光狭缝为10nm，发射光狭缝为10nm，激发光波长为490nm条件下扫描，获得其荧光信号光谱；铅和空白对照液的荧光光谱信号分别为F和F₀，计算相对荧光强度Q=[F₀-F]/F₀×100%。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征是，所述的标准曲线是指：根据铅浓度和相对荧光强度绘制的回归方程Q=0.452C_Pb+15.89，其中：C_Pb的单位为：ppb。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的定量检测是指：在2mL刻度离心管中，加入5μL浓度为5μM的功能核酸母液，补加去离子水至445μL，充分混匀后再取50μL待测水样加入；然后置于25°C条件下孵育10min后，加入400×DNA嵌入剂母液5μL，25°C条件下避光孵育10min后，用荧光光度计进行扫描测定信号并计算相对荧光强度，经查对标准曲线求得样品中铅含量。