[发明专利]表达人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒/基因组质粒及其抗肿瘤治疗的应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种表达人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒/基因组质粒及其抗肿瘤治疗的应用。 

背景技术

根据前期的研究基础，已成功构建人源化cHAb18抗体，并能够在CHO-TS28工程细胞中表达并分泌。 

另外专利号为ZL200710018423.6也公开了肿瘤靶向性重组新城疫病毒构建方法，NDV Italien株基因组全长为15186bp，以F和HN基因之间的非编码区为分割点，分别将NDV Ital ien基因组的上、下两部分构建于不同质粒当中，并命名为pBR-rNDV-Seg1和pBR-rNDV-Seg2。将上述分段基因组质粒pBR-rNDV-Seg1和pBR-rNDV-Seg2经酶切并连接，构建得到单一片段基因组质粒pBR-rNDV，同时在片段两侧插入T7RNA聚合酶启动子和HDV自身催化核酶序列，同时，该病毒基因组质粒F和HN基因之间的非编码区中插入了外源基因转录盒，利用AgeI酶切位点，能够插入外源片段，以构建表达外源基因的重组NDV。本申请旨在利用肿瘤靶向性重组新城疫病毒构建方法构建携带人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒，并对其进行了纯化以及鉴定。通过对病毒功能的研究，充分证实了利用NDV反向遗传操作系统所构建的重组病毒rNDV-18HL具有肿瘤杀伤效应，同时，还能够高效表达cHAb18抗体，并将该外源基因编码的抗体释放至细胞周围的环境之中，可以发挥抗体靶向封闭肿瘤相关抗原的抑癌侵袭转移功能，该重组病毒无疑为抗体治疗联合溶瘤病毒治疗，从而研制肿瘤靶向杀伤药物提供了一种新策略，显示良好的应用前景。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种表达人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒/基因组质粒及其抗肿瘤治疗的应用，其构建了携带人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒具备选择性杀伤肿瘤细胞能力，还能够高效表达人源化嵌合抗体cHAb18，并将该外源基因表达产物释放至细胞周围的环境中。 

本发明的技术解决方案是： 

一种表达人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒，其特征在于：它是基于新城疫病毒Italien株的基础上构建的重组新城疫病毒；该病毒可以选择性杀伤人肿瘤细胞，并且同时表达人源化嵌合抗体cHAb18。 

一种可以用于体外复活上述的重组新城疫病毒的新城疫病毒基因组质粒，其特征在于：它是由从稳定表达人源化嵌合抗体cHAb18的工程细胞系CHO-TS28中获得该抗体轻、重链的编码基因，通过overlap PCR的方法获得cHAb18轻重链基因融合片段序列，并且在其上下游分别加入病毒转录调控序列；得到人源化嵌合抗体cHAb18转录盒片段，再将该片段插入pBR-rNDV质粒中，获得重组新城疫病毒基因组质粒pBR-rNDV-18HL。 

上述重组病毒基因序列的cDNA序列是序列表<400>1的序列。 

上述新城疫病毒基因组质粒pBR-rNDV-18HL全长序列是序列表<400>2的序列。 

上述cHAb18轻重链基因融合片段序列是序列表<400>3的序列。 

一种表达人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒的复活方法，该方法包括：将pBR-rNDV-18HL、pcDNA-NP、pcDNA-P和pcDNA-L共同转染能够稳定表达T7RNA聚合酶的BHK-21细胞，获得复活的重组病毒rNDV-18HL。 

一种表达人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒的纯化方法，其特征在于：该方法采用噬菌斑纯化的方式对重组病毒进行纯化。 

一种表达人源化嵌合抗体cHAb18的重组新城疫病毒用于抗肿瘤研究和治疗的应用，其特征在于：该病毒感染肿瘤细胞后能表达人源化嵌合抗体cHAb18，人源化嵌合抗体cHAb18能够特异性封闭肝癌相关抗原分子CD147，抑制肿瘤细胞和间质细胞表达和分泌基质金属蛋白酶(MMPs)，从而抑制肿瘤细胞的运动和侵袭能力；同时病毒自身复制可以干扰肿瘤细胞的正常代谢，引起细胞间融合并最终死亡，达到杀伤肿瘤细胞的目的。 

本发明的有益效果是：