[发明专利]一种茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于抗性植物检测领域，具体涉及一种茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法。 

背景技术

茄子黄萎病（Verticillium wilt）是一种世界性土传病害，一般年份发病率15%-20%，严重年份发病率达70%以上，造成茄子大幅度减产，甚至绝收，素有茄子“癌症”之称（Zeng等, 2009）。近年来，随着茄子种植面积的扩大，连作现象日益严重，使茄子黄萎病逐年加重。该病为全株病害，病症自下而上或从半边向全株蔓延，典型症状包括枯死型、黄斑型、黄色斑驳型及矮化型4种类型（董金臬，2001；董国菊和贺运春，2004）。发病适温为20-30℃，适温下湿度越大，发病越严重。发病初期病叶在晴天高温时萎蔫，早晚可恢复，后期病叶由黄变褐，最终干枯脱落，严重时全株枯死。研究表明，大丽轮枝菌是危害我国蔬菜及农作物生产的主要黄萎病致病菌（陆家云, 1997；朱建兰和常永义, 2004），寄主非常广泛，可侵染茄科、十字花科、豆科、葫芦科、蔷薇科、菊科、唇形花科等38科660多种作物，且寄主范围仍在逐年扩大（Pegg, 1989; Klosterman等, 2009）。该病原菌通过堵塞导管、分泌脂多糖蛋白复合物及利用某些胞外酶降解细胞壁等方式，引发黄萎病。 

培育抗病品种是防治茄子黄萎病的根本手段。抗性资源的获得对于抗病育种意义重大，如何客观、快速地评价茄子品系黄萎病抗性地强弱是茄子抗黄萎病育种过程中最基础、最重要的环节。长期以来，育种者多采用病源圃直接诱导发病或幼苗期土壤接菌的方法鉴定种质资源的黄萎病抗性，前者严重依赖于自然发病条件，如果环境条件不适合发病或者病源圃病菌分布不均匀，容易造成抗性误判，而后者需要土壤接菌，也容易存在接菌不均匀的情况，导致鉴定结果不准确。 

如能找到快速鉴定茄子黄萎病抗性的方法，无疑将大大加快茄子抗黄萎病育种的进程。因此，科研和实践中均需要一种接种后茄子存活率高、发病迅速、 育苗时间短、管理简便、适合大批量育种材料鉴定的茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，该方法包括茄子种子催芽、播种与幼苗培育、黄萎病孢子悬浮液的制备、病原菌侵染处理、发病调查等步骤。该方法接种后茄子存活率高、发病迅速、育苗时间短、管理简便、适合大批量育种材料鉴定。 

本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 

一种茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，该方法包括以下步骤： 

A、茄子种子催芽： 

选择茄子种质资源作为鉴定对象； 

挑选茄子种质资源的籽粒饱满的种子，进行50℃、30分钟温汤浸种，再将种子放在铺好吸水纸的培养皿中，最后30℃恒温处理，直至得到萌发的种子； 

B、播种与幼苗培育： 

将萌发的种子播种于育苗培养基质，进行培养，得到两叶一心的幼苗； 

C、黄萎病孢子悬浮液的制备： 

a.选择田间典型病株，将茄子植株病原菌可能较密集的部位进行分割； 

b.将上述病原菌可能较密集的部位进行消毒处理，得到消毒处理后的部位；  

c.将消毒处理后的部位进行解剖，得到髓部组织，再将述髓部组织切成0.5cm小段，并接入PDA平板培养基中； 

d. 当接种后的PDA平板培养基的表面植物组织周围长出白色菌落后，将该白色菌落转入PDA 斜面培养基中保存备用； 

e. 从转入白色菌落的PDA斜面培养基中取黄萎菌，转入PDA平板培养基中，进行27℃恒温培养2-3周，得到培养好的黄萎菌菌块； 

f. 将培养好的黄萎菌菌块于无菌水中进行振荡、过滤，利用血球计数板调整孢子浓度，得到黄萎菌孢子悬浮液； 

D、病原菌侵染处理： 

a.将两叶一心的幼苗从所述育苗培养基质中拔出，进行清洗处理，再进行伤根处理，得到伤根后的幼苗； 

b.将伤根后的幼苗进行侵染处理，得到侵染苗； 

E、发病调查： 

分别于侵染处理后的5天、10天、15天、20天，调查所述侵染苗的发病状况，根据茄子黄萎病病情分级标准确定0、1、2、3、4共5个发病等级，再根据该发病等级计算病情指数，最后根据该病情指数判断所述茄子种质资源的茄子黄萎病抗性分级。 

上述的茄子黄萎病病情分级标准为：