[发明专利]一种茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法

权利要求书

1.一种茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

A、茄子种子催芽：

选择茄子种质资源作为鉴定对象；

挑选茄子种质资源的籽粒饱满的种子，进行50℃、30分钟温汤浸种，再将种子放在铺好吸水纸的培养皿中，最后30℃恒温处理，直至得到萌发的种子；

B、播种与幼苗培育：

将萌发的种子播种于育苗培养基质，进行培养，得到两叶一心的幼苗；

C、黄萎病孢子悬浮液的制备：

a.选择田间典型病株，将茄子植株病原菌可能较密集的部位进行分割；

b.将上述病原菌可能较密集的部位进行消毒处理，得到消毒处理后的部位； 

c.将消毒处理后的部位进行解剖，得到髓部组织，再将述髓部组织切成0.5cm小段，并接入PDA平板培养基中；

d. 当接种后的PDA平板培养基的表面植物组织周围长出白色菌落后，将该白色菌落转入PDA 斜面培养基中保存备用；

e. 从转入白色菌落的PDA斜面培养基中取黄萎菌，转入PDA平板培养基中，进行27℃恒温培养2-3周，得到培养好的黄萎菌菌块；

f. 将培养好的黄萎菌菌块于无菌水中进行振荡、过滤，利用血球计数板调整孢子浓度，得到黄萎菌孢子悬浮液；

D、病原菌侵染处理：

a.将两叶一心的幼苗从所述育苗培养基质中拔出，进行清洗处理，再进行伤根处理，得到伤根后的幼苗；

b.将伤根后的幼苗进行侵染处理，得到侵染苗；

E、发病调查：

分别于侵染处理后的5天、10天、15天、20天，调查所述侵染苗的发病状况，根据茄子黄萎病病情分级标准确定0、1、2、3、4共5个发病等级，再根据该发病等级计算病情指数，再根据该病情指数判断所述茄子种质资源的茄子黄萎病抗性分级。 

2.根据权利要求1所述茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤E中，茄子黄萎病病情分级标准为：

0级：无病株；1级：全株黄化萎蔫叶片少于1/4；2级：全株黄化萎蔫叶片大于等于1/4且小于1/2；3级：全株黄化萎蔫叶片占大于等于1/2且小于3/4；4级：全株黄化萎蔫叶片达到3/4以上至全部萎蔫枯死。

3.根据权利要求1所述茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤E中，病情指数计算方式为：

病情指数DI = ∑（级数 × 株数）/（最高级数 × 总株数）× 100；

茄子黄萎病抗性分级标准如下：

抗病（R）：DI≤15；中抗（MR）：15＜DI≤30；耐病（T）：30＜DI≤50；中感（MS）：50＜DI≤70；感病（S）：DI＞70。

4.根据权利要求1所述茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤A中茄子种质资源包括辽茄6号、西安绿茄、辽茄3号、辽茄5号、天津快圆和托鲁巴姆。

5.根据权利要求1所述茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤C-a的病原菌可能较密集的部位为茎基、茎杆、叶柄。

6.根据权利要求1所述茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤C-d中的PDA平板培养基的制备方法为：去皮马铃薯200 g，切成边长约1.5 cm的小块，加入1000mL水煮沸30 min，用4层纱布过滤，向滤液中加入葡萄糖20 g和琼脂糖15 g，加热溶解后再补足水至1000 mL；pH自然，121 ℃，30 min灭菌；之后在超净工作台上倒平板，得到PDA平板培养基。

7.根据权利要求1所述茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤C-f的黄萎菌孢子悬浮液孢子浓度为0.8-1.5×10⁷个/mL。

8.根据权利要求1所述茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤D-a的伤根处理为：剪除长度为1.5-2.5cm的主根根尖及相应须根。

9.根据权利要求1所述茄子黄萎病抗性的快速鉴定方法，其特征在于：步骤D-b中侵染处理，是将伤根后的茄子幼苗放置到黄萎病孢子悬浮液中，用无菌透气材料堵住容器口；再放置于日光温室，环境温度为白天25-30℃，夜间15-20℃。