[发明专利]一种双酶偶联制备β-丙氨酸的方法

权利要求书

1.一种双酶偶联制备β-丙氨酸的方法，其特征是由以下步骤构成：

（1）分别将具有天冬氨酸酶活性和天冬氨酸-α-脱羧酶活性的菌株在培养基中培养，产生高活性的天冬氨酸酶和天冬氨酸-α-脱羧酶；

（2）将具有天冬氨酸酶活性和天冬氨酸-α-脱羧酶活性的湿菌体或粗酶液按一定时间顺序分别与pH 7.0～7.5的富马酸铵水溶液混合，再加入表面活性剂，25℃～55℃条件下进行酶促反应；或者将具有天冬氨酸酶活性的湿菌体或粗酶液先与pH 7.0～7.5的富马酸铵水溶液混合，加入表面活性剂，25℃～55℃酶促反应后浓缩处理得到天冬氨酸铵盐固体，再将具有天冬氨酸-α-脱羧酶活性的湿菌体或粗酶液与天冬氨酸铵盐水溶液混合，加入表面活性剂，25℃～55℃条件下进行酶促反应；最后利用等电点结晶或等电点结晶与离子交换树脂相结合的方法分离反应生成的β-丙氨酸。

2.根据权利要求1所述的一种双酶偶联制备β-丙氨酸的方法，其特征在于步骤（1）所述的具有天冬氨酸酶活性的菌株为Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655或Escherichia fergusonii ATCC 35469；具有天冬氨酸-α-脱羧酶活性的菌株为Bacillus cereus ATCC 10987或Corynebacterium glutamicum ATCC 13032。

3.根据权利要求1所述的一种双酶偶联制备β-丙氨酸的方法，其特征在于上述步骤（1）中的培养基碳源采用葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和/或果糖，培养基中总碳源质量浓度为1～30 g/L；氮源采用牛肉膏、酵母膏、玉米浆、蛋白胨和/或豆饼水解液，培养基中总氮源质量浓度为1～30 g/L。

4.根据权利要求1所述的一种双酶偶联制备β-丙氨酸的方法，其特征在于步骤（2）所述的富马酸铵水溶液或天冬氨酸铵盐水溶液浓度为30 g/L～300 g/L。

5.根据权利要求1所述的一种双酶偶联制备β-丙氨酸的方法，其特征在于步骤（2）所用的表面活性剂为吐温-80或十六烷基三甲基溴化铵或聚乙二醇辛基苯基醚，浓度为0.05 g/L～5.0 g/L。