[发明专利]一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物监测技术领域，尤其是一种用于快速检测大片形吸虫病的免疫层析快速检测试纸条及其制备方法。 

背景技术

大片形吸虫(Fasciola gigantica)是一种寄生于人畜的重要寄生虫，在家畜中主要危害牛羊，感染牛后能引起急性或慢性的肝炎和胆管炎，导致全身性的中毒现象和营养障碍，使牛免役力降低，肉奶产量减少，品质下降，严重感染时，还可引起大批死亡，给畜牧业、农业都带来巨大的经济损失；大片形吸虫感染也可以引起人的严重寄生虫病，如2011年我国云南宾川爆发人群大片形吸虫病，由于缺乏有效的诊断检测方法，造成重大疫情，共有20多人感染发病。因此，对该病的防治要依赖有效的检测诊断方法。目前该病常用的检测、诊断方法主要有：（1）传统的粪便虫卵检查法，该法简便、不需要昂贵仪器设备，但检出率低，且不能进行早期诊断；（2）分子生物学检测方法，如聚合酶链反应法，该法灵敏度高，但需要特殊昂贵的仪器，操作复杂、容易出现假阳性结果；（3）免疫学检测方法，如酶联免疫吸附测定法。目前国内报道的大片形吸虫病的酶联免疫吸附测定法多为检测抗体的方法，但该法不能区分现症感染和既往感染，因此不能对疫病做出准确的诊断，同时该法还需要借助特殊的仪器如酶标仪才能进行检测。 

发明内容

本发明提供一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条及其制备方法，它可以解决现有的用于检测和诊断大片形吸虫病的设备价格昂贵、操作复杂的问题。 

为了解决上述技术问题，本发明的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的技术方案是：包括有支撑被衬，该支撑被衬上依次粘贴有包被膜、标记垫和样品垫，在所述支撑被衬的手持端粘贴有吸水垫；所述标记垫包被有抗大片形吸虫ES（分泌排泄）抗原的7D1单克隆抗体，所述包被膜上前部设有检测线，所述包被膜上后部设有质控线，所述检测线包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体，所述质控线包被有兔抗小鼠免疫球蛋白抗体。      7D1单克隆抗体和7D4单克隆抗体的制备方法见：《抗大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定》，南方农业学报2012年43卷第9期。 

上述技术方案中，更具体的方案可以是：所述样品垫由玻璃纤维膜制成，所述标记垫由聚酯纤维膜制成，所述包被膜为硝酸纤维素膜，所述吸水垫为粗纤维吸水纸，所述支撑被衬为聚氯乙烯板。 

进一步的：所述标记垫包被的7D1单克隆抗体为胶体金标记的抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体。 

本发明的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的制备方法为A、包被膜（4）的制备： 

a.用硝酸纤维素膜制成包被膜（4），并在包被膜（4）上同一面靠近标记垫（3）端设置有检测线（T），另一端设置有质控线（C）；

b. 将抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体稀释至包被浓度为0.15 mg/mL -0.50 mg/mL，按包被量为每垫0.5μL -5μL得到检测包被液，并将其包被在检测线（T）上，该检测线（T）能够识别大片吸虫ES抗原；

c. 将兔抗小鼠免疫球蛋白抗体稀释至0.10 mg/mL -0.50 mg/mL的浓度，按包被量为每垫0.5μL -5μL得到质控包被液，并将其包被在质控线（C）上，干燥，密封保存即得包被膜（4）；

B、标记垫（3）的制备：

a.对抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体进行胶体金的制备和单克隆抗体标记；

b.将胶体金和单克隆抗标记的抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体1:5稀释后，以每垫5μL-25μL的量喷点在标记垫进行包被，然后将标记垫干燥、密封保存即得标记垫（3）；

所述抗大片形吸虫的ES抗原的7D1单克隆抗体能特异识别大片形吸虫ES抗原；

C、样品垫（2）的制备：用玻璃纤维膜制成样品垫（2）；

D、将包被膜（4）、标记垫（3）、样品垫（2）依次从下往上搭接好后粘贴在支撑衬板（1）上，最后将吸水垫（5）搭接包被膜（4）上，即得到大片形吸虫免疫层析快速检测纸条。

胶体金的制备和单克隆抗标记方法参考文献：《水牛伊氏锥虫病免疫胶体金试纸条的研制及初步应用》，畜牧兽医学报2011年42卷第7期。

进一步的：D步骤中将标记垫烘干的温度为36°C-38°C，E步骤中干燥的温度为36°C-38°C。