[发明专利]一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条，其特征在于：包括有支撑被衬（1），该支撑被衬上依次粘贴有包被膜（4）、标记垫（3）和样品垫（2），在所述支撑被衬（1）的手持端（1-1）粘贴有吸水垫（5）；所述标记垫（3）包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体，所述包被膜（4）上前部设有检测线（T），所述包被膜（4）上后部设有质控线（C），所述检测线（T）包被有抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体，所述质控线（C）包被有兔抗小鼠免疫球蛋白抗体。

2.根据权利要求1所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条，其特征在于：所述样品垫（2）由玻璃纤维膜制成，所述标记垫（3）由聚酯纤维膜制成，所述包被膜（4）为硝酸纤维素膜，所述吸水垫（5）为粗纤维吸水纸，所述支撑被衬为聚氯乙烯板。

3.根据权利要求1或2所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条，其特征在于：所述标记垫（3）包被的7D1单克隆抗体为胶体金标记的抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体。

4.权利要求1-3所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的制备方法，其特征在于其制备步骤如下：

A、包被膜（4）的制备；

a. 由硝酸纤维素膜制成包被膜（4）上同一面的两端分别设置有检测线（T）和质控线（C）；

b. 检测线（T）设置在包被膜（4）的一端，检测线（T）上包被有大片吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体，能够识别大片吸虫ES抗原；

c. 质控线（C）设置在包被膜（4）的另一端，质控线（C）包被有兔抗小鼠免疫球蛋白抗体；

d．将抗大片形吸虫ES抗原的7D4单克隆抗体稀释至包被浓度为0.15 mg/mL -0.50 mg/mL，按包被量为每垫0.5μL -5μL包被至包被膜的检测线（T）上；兔抗小鼠免疫球蛋白抗体稀释至0.10 mg/mL -0.50 mg/mL的浓度，按包被量为每垫0.5μL -5μL包被至包被膜的质控线（C）上，干燥，密封保存；

B、标记垫（3）的制备；

a.以常规的方法进行胶体金的制备和单克隆抗标记；

b.将胶体金和单克隆抗标记的抗大片形吸虫ES抗原的7D1单克隆抗体1:5稀释后，以每垫5μL-25μL的量喷点在标记垫进行包被，然后将标记垫干燥、密封保存，所述抗大片形吸虫的ES抗原的7D1单克隆抗体能特异识别大片形吸虫ES抗原；

C、样品垫（2）的制备；

样品垫（2）由玻璃纤维膜制成；

D、将样品垫（2）、标记垫（3）、包被膜（4）、吸水垫（5）依次搭接粘贴在支撑衬板（1）上，即得到本大片形吸虫免疫层析快速检测纸条。

5.根据权利要求4所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的制备方法，其特征在于：

D步骤中将标记垫烘干的温度为36°C-38°C，E步骤中干燥的温度为36°C-38°C。

6.根据权利要求1或4或5所述的大片形吸虫免疫层析快速检测试纸条的制备方法，其特征在于：兔抗小鼠免疫球蛋白抗体的制备方法是，把质量浓度为1mg/mL的小鼠免疫球蛋白与弗氏完全佐剂按1：0.5-1.5比例混匀，按0.5ml-2.0ml /只兔子的剂量对兔子进行脚掌皮下注射免疫；6-8天后，用质量浓度为2mg/ml的小鼠IgG与弗氏不完全佐剂按1：0.5-1.5比例混匀，以0.5ml-2.0ml/只兔子的剂量对上述兔子进行胭淋巴结注射二次免疫；9-11天后，按二次免疫的方法加强免疫一次，免疫后，定期耳静脉采血测定血清效价，血清效价到达后，心脏采血，分离血清；采用常规的辛酸—饱和硫酸铵法初步纯化纯后，再用 portion G 蛋白柱进一步纯化；当用常规的琼脂扩散试验测定的兔抗小鼠免疫球蛋白二抗效价为1:10⁴，用BCA蛋白浓度试剂盒测定兔抗小鼠免疫球蛋白二抗浓度为1.22 mg/ml时，兔抗小鼠免疫球蛋白抗体的制备完成，在4℃的条件下保存待用。