[发明专利]一种耐低温草菇菌株及其选育方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种耐低温草菇菌株及其选育方法。 

背景技术

草菇[Volvariella volvacea(Bull.ex Fr.)Sing.]起源于中国，又称中国菇，分类上属于担子菌亚门，层菌纲，无隔担子菌亚纲，伞菌目，鹅膏菌科，草菇属。草菇是一种喜湿、喜温的草腐真菌，生产周期短，成本低，在热带和亚热带高温多雨地区广为栽培。草菇以鲜销为主，鲜食口感较好，味道鲜美、肉质细腻，具有丰富的营养和保健作用，深受人们喜欢。但草菇子实体采收后，在常温下仍进行旺盛的生理代谢活动。在生理上，草菇的开伞问题是食用菌中最为突出的，它不论是在菇床上还是采收后，菌柄会以2～3cm/h的速度迅速生长，3～4h内就开伞、变色、变质老化，降低了营养价值并大大缩短了货架期。因此，采收后的草菇子实体急需低温储存，以抑制其旺盛的生理代谢活动。然而，在低温5～10℃条件下，草菇子实体会变软、自溶液化，以致腐化变质而丧失食用价值，从而失去了商品价值；所以，草菇子实体储存问题是草菇生产的关键制约因素。 

草菇为同宗结合真菌，生活史复杂，且菌丝间无锁状联合，杂种选择缺乏遗传标记，这给草菇常规育种带来很大困难。为了培育出子实体耐低温储藏的草菇菌种，现有方法有：1)通过对常规菌株进行自然低温驯化，多次重复出菇比较试验，从中筛选出耐低温草菇菌株。该选育方法建立在菌株自然变异的基础上，自然变异由于变异率极低且变异方向不确定，因此该选育方法具有盲目性且成功率较低；2)用诱变的方法筛选耐低温突变草菇菌株，虽然筛选到耐低温的突变菌株并不困难，但还达不到生产上应用的要求；3)用基因枪把抗冷蛋白基因导入草菇，希望构建耐低温的草菇工程菌，但至今也没能构建出可用于生产的理想菌株。因此，草菇不耐低温问题仍然是食用菌界一个难题。 

目前，对草菇遗传背景还缺乏了解，且所筛选到的耐低温草菇菌株多为通过诱变选育得到的，如再继续采用常规诱变育种手段则难以获得明显的效果。因此，耐低温草菇菌株的选育成为当前草菇研究的首要任务。 

基因组重排(Genome shuffling)技术是近几年新发展起来的一种微生物育种方法，该 技术通过定向进化技术使菌株的基因组得到随机重排而达到选育目的，具有不需要事先知道供试微生物的遗传背景也可以对其进行遗传育种的突出优点，使之成为了一种极其高效的微生物育种方法。目前，国内外目前尚未见应用基因组重排技术选育草菇耐低温菌株的报道。 

发明内容

本发明提供了一株耐低温草菇菌株及其选育方法，采用基因组重排技术选育出耐低温草菇菌株，明显提高其子实体耐低温能力，解决现有技术中草菇低温储藏难题，并且有效地扩大草菇种植季节，提高草菇产量与质量，提高经济效益。 

本发明所述的草菇（Volvariella volvacea）SVF-4，其生物保藏号为CCTCC NO：M2013207，保藏日期为2013年5月15日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心（简称CCTCC），保藏地址为武汉市武昌区珞珈山武汉大学，邮编：430072。 

本发明所述的耐低温草菇菌株，菌落4d长满平板，初期为白色，中期从中心向边缘逐渐变淡黄色，后期颜色加深变红，培养基出现红铁锈色；菌株菌丝部分内生，气生菌丝较多，菌丝有隔，多分枝，菌丝直径4.01～11.98μm，菌丝长25.62～320.08μm，菌丝细胞内多核，细胞之间未见锁状联合；耐低温草菇菌株能正常出菇，菌丝在0℃条件下42h仍然有生命活力，子实体10℃条件下可储藏28h。 

本发明所述的耐低温草菇菌株的选育方法，具体包括如下步骤： 

(1)出发菌株库构建 

收集到16株草菇菌株(V23、V9715、V9、V106、V97、V874、V5-2、VW、VG、VT-1、VT-2、V14、NO3、VB2、V28、V5)，构建多基因型出发菌株库。 

(2)原生质体制备 

把出发菌株分别接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)固体培养基上，32±0.5℃恒温培养3～4d，取PDA固体培养基上生长旺盛的菌丝，接种于PDA液体培养基中，32±0.5℃条件下静止培养，每天早晚各摇动1次；将培养1～3d的菌丝用无菌水洗涤干净后用灭菌滤纸吸去表面水分待用。