[发明专利]一种大量快速提取鲎素肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，涉及鲎素肽，尤其是一种大量快速提取鲎素肽的方法。 

背景技术

鲎也称马蹄蟹，属肢口纲(Merostomata)剑尾目(Xiphosura)的海洋节肢动物，共4种，具有很高的药用价值，分布于我国鲎的种类主要为东方鲎。鲎血细胞提取物鲎试剂，可以准确、快速地检测人体内部组织是否感染细菌；在制药和食品工业中，可用它对毒素污染进行监测。鲎的肉、卵均可食用，其壳、尾、卵、肉和血均可入药。 

鲎素肽来源于鲎血细胞提取物，是含有17个氨基酸残基的多肽，氨基酸序列：NH₂-K-W-C-F-R-V-C-Y-R-G-I-C-Y-R-R-C-R-CONH₂。含两对二硫键：第三位半胱氨酸残基与第十六个半胱氨酸残基，第七位半胱氨酸残基与第十二个半胱氨酸残基各形成一对二硫键。化学性质稳定，耐高温。各种研究资料显示鲎素肽具有强烈抗菌作用，抑制革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌，真菌生长，同时还发现鲎素具有抗肿瘤作用，国内外均有文献报道对白血病细胞，肺癌细胞，肝癌细胞，胃癌细胞具有抑制作用，毒副作用低。 

目前鲎素肽的获得方法主要有三种：第一种是从天然鲎细胞裂解液中提取纯化获得，是将鲎细胞裂解粗体液经过凝胶层析和离子交换层析纯化的方法；第二化学合成的方法获得，是基于已报道的鲎素肽的氨基酸序列及分子结构运用合成化学仿制鲎素肽结构的方法；第三利用遗传工程获得鲎素肽，将鲎素肽基因克隆并整合到特定载体上，转入宿主细胞中进行表达，提取纯化后获得的方法。三种方法中以遗传工程方法最为先进，不需要对鲎取血，一劳永逸，但该方法要求技术难度大，步骤繁琐，所涉及的试剂和设备价格昂贵，并且构建的克隆在表达过程中易被宿主额外修饰，目的蛋白活性也不尽理想。化学合成方法合成鲎素肽价格昂贵。而目前报道的从天然鲎血细胞中获得鲎素肽的方法，存在处理量小、操作周期长、不能连续操作，因此主要用于实验室，不易进行规模化生产的缺点。虽然考虑到可以从提取鲎试剂的废料中应用该法使其变废为宝，但因其缺点明显也仅停留在少量提取和研究中使用。 

鲎试剂生产的废料中鲎素肽的含量要比未经萃取的鲎细胞裂解产物含量低，现有技术对未经萃取的鲎细胞裂解产物提取鲎素肽的方法由于缺点明显也仅仅停留在小量制取和实验室研究使用，而对鲎试剂生产的废料中鲎素肽的再利用也起不到广泛的推广。