[发明专利]一种大量快速提取鲎素肽的方法有效
| 申请号： | 201310244598.4 | 申请日： | 2013-06-19 |
| 公开（公告）号： | CN103275191A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 韩钊;辛鹤林;苑庆华;吴梦楠;梁玲玲;李萌;李彦彩 | 申请（专利权）人： | 天津兰瑞生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K7/08 | 分类号： | C07K7/08;C07K1/34 |
| 代理公司： | 天津盛理知识产权代理有限公司 12209 | 代理人： | 韩奎勇 |
| 地址： | 300384 天津市滨海新区华苑产*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大量 快速 提取 鲎素肽 方法 | ||
1.一种大量快速提取鲎素肽的方法，其特征在于：该方法的步骤如下：
⑴原料处理:
a，收集鲎血细胞备用；
b，将鲎血细胞悬浮于Tris-HCl,NaCl缓冲液匀浆；
c，然后8000r/min下离心30min，弃上清液，所收集的沉淀用同一缓冲液洗两次；
⑵酸解：
a，洗涤后的沉淀以固液比例1：6.5～8的比例加入酸液匀浆；
b，匀浆液在8000r/min，离心30min，收集上清液；
c，其沉淀用酸液重抽提，同样收集上清液，最后弃去沉淀，三次收集的上清液即为所需的鲎血细胞酸抽提液；
⑶调pH值去沉淀：
a，将鲎血细胞酸抽提液用NaOH调节pH至6.5，离心去除沉淀；
b，再用0.1－0.22μm的膜进行过滤，得上清液；
⑷热变性处理：
a，将上步所得上清液沸水浴处理5～10min，8000r/min离心20min弃沉淀收集上清液；
b，再用0.1－0.22μm的膜进行过滤，得上清液；
⑸截留分子量为10kD超滤膜处理；
⑹截留分子量为3kD超滤膜处理；
⑺脱盐处理；
⑻冷冻干燥制备成干粉低温保存。
2.根据权利要求1所述的大量快速提取鲎素肽的方法，其特征在于：所述步骤⑴中的Tris-HCl为20m mol/L，所述NaCl为pH8.8含50m mol/L NaCl。
3.根据权利要求1所述的大量快速提取鲎素肽的方法，其特征在于：所述步骤⑵中的酸液为20m mol/L HCl。
4.根据权利要求1所述的大量快速提取鲎素肽的方法，其特征在于：所述步骤⑵中的离心温度为4℃。
5.根据权利要求1所述的大量快速提取鲎素肽的方法，其特征在于：所述步骤⑸及步骤⑹的超滤膜处理可具体运用超滤管、超滤杯或切向流超滤系统设备来完成。
6.根据权利要求1所述的大量快速提取鲎素肽的方法，其特征在于：所述步骤⑺脱盐处理可具体通过截留分子量500D透析袋或超滤膜来完成。
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