[发明专利]一种采用胎源性组织重建全皮的组织工程方法

权利要求书

1.一种采用胎源性组织重建全皮的组织工程方法，包括供体一一同种异体组织采集，窗口期检测，建库，皮肤种子细胞分离，分离后种子细胞入库，低温储存，建模，喷涂于三维支架进行皮肤干细胞培养，48小时后进行临床移植。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述供体——同种异体组织采集步骤中，供体为12-24周人工流产的胎儿，供体采集前，孕妇需进行常规体检及卫生管理部门规定的血尿常规及生化检测，并按照本方法流程规定的检测项目进行加项检测，所述检测项目包括艾滋病、梅毒、淋病和/或染色体；对检测符合标准的孕妇，采用常规人工流产术获得胎儿，将取出的胎儿用生理盐水清洗后放入专用营养液，于12小时内送至细胞库进行窗口期检测生产程序。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：皮肤种子细胞分离前进行组织清洗，清洗液采用磷酸缓冲盐，其组成为：NaCl6.80g/l，Na₂HPO₄1.48g/l，KH₂PO₄0.43g/l，清洗皮肤组织；洗3次。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：种子细胞的分离步骤为：①用剪刀将皮肤组织切割，过筛；②胰酶化细胞培养，培养液包括EDTA钙离子螯合剂，乙二胺四乙酸和胰蛋白酶溶液和Gibco培养基。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述入库步骤中，在置入液氮灌前，对每一安培细胞进行数据采集、检录，进行细胞库日志编辑，对每份细胞进行二维码标注，并录入数据库，并将每一次解冻、培养数据录入数据库，并将变化及检录日期签名扫二维码进入数据库。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的细胞培养步骤包括：将细胞库中的胎儿皮肤种子细胞调出并解冻，进行细胞支架三维培养前，再次对种子细胞进行检录，并将合格的细胞进行数据二维码扫描，与库标一致性的胎儿皮肤种子细胞进行“三维支架均匀铺设”，胎儿皮肤种子细胞在支架上2500个/平方厘米铺开，不需要生长因子，置入二氧化碳培养箱，37℃48小时，贴到病人经过清创处理的皮肤伤口处。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的建模采用的材料为硬质水凝胶，根据临床需要定制硬质水凝胶膜，该膜大于30×30cm。

8.一种聚合物静电纺丝纳米法制备聚合物支架的方法，其通过外加电场力使聚合物溶液或熔体克服表面张力形成射流，短时间内被拉伸千万倍，并随溶剂挥发射流固化形成连续的亚微米和/或纳米级超细纤维，从而形成支架。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在支架中引入细胞调控因子或活细胞，支持细胞在支架内部生长、增殖和迁移，提高组织的形成率。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述的聚合物溶液包括：1)胎儿皮肤细胞细胞外基质；2)胶原蛋白：胎源性皮肤种子细胞带入胎源性结蹄组织中的胶原蛋白；3)水凝胶，和4)聚乙醇酸。