[发明专利]一种利用L-赖氨酸2-单加氧酶和δ-戊酰胺水解酶催化制备5-氨基戊酸的方法

权利要求书

1.一种利用L-赖氨酸2-单加氧酶和δ-戊酰胺水解酶催化制备5-氨基戊酸的方法，步骤是：

（1）将能表达L-赖氨酸2-单加氧酶DavB和δ-戊酰胺水解酶DavA的工程大肠杆菌发酵培养，获得含L-赖氨酸2-单加氧酶DavB和δ-戊酰胺水解酶DavA的工程菌细胞悬液；

（2）对步骤（1）获得的细胞悬液中蛋白进行分离纯化，分别得到L-赖氨酸2-单加氧酶DavB和δ-戊酰胺水解酶DavA；

（3）将L-赖氨酸2-单加氧酶DavB和δ-戊酰胺水解酶DavA作为催化剂与L-赖氨酸水溶液混合，使混合物中L-赖氨酸的浓度为20～40克/升，DavA蛋白浓度为0.1～1.0克/升，DavB蛋白浓度为0.1～1.0克/升；然后在30～42℃、pH6.5～7.5条件下，并以180转/分钟振荡催化反应16～24小时，得含5-氨基戊酸的转化液；

（4）采用异硫氰酸苯酯柱前衍生高效液相色谱法进行5-氨基戊酸的浓度检测，算出产率。

2.如权利要求1所述利用L-赖氨酸2-单加氧酶和δ-戊酰胺水解酶催化制备5-氨基戊酸的方法，其特征在于：步骤（2）所述细胞悬液中蛋白分离纯化的方法是：将细胞悬液以功率600瓦、作用5秒停5秒的条件超声破碎10分钟，然后将菌体破碎液在12,000rpm、4℃离心30分钟，上清液即为粗酶液；将粗酶液利用AKTA Basic10蛋白质快速纯化系统，采用镍柱亲和层析，首先用体积比为100%A液冲洗镍柱至基线水平后进样，然后通过逐步提高流动相中B液的比例，其中A液为：咪唑20mM、Na₂HPO₄20mM、NaCl500mM，B液为：咪唑500mM、Na₂HPO₄20mM、NaCl500mM，均调pH至7.4，收集60%B液洗脱组分；分别得到L-赖氨酸2-单加氧酶DavB和δ-戊酰胺水解酶DavA。

3.如权利要求1所述利用L-赖氨酸2-单加氧酶和δ-戊酰胺水解酶催化制备5-氨基戊酸的方法，其特征在于：步骤（3）所述混合物中L-赖氨酸的浓度为30～35克/升，DavA蛋白浓度为0.5～0.6克/升，DavB蛋白浓度为0.5～0.6克/升。

4.如权利要求1所述利用L-赖氨酸2-单加氧酶和δ-戊酰胺水解酶催化制备5-氨基戊酸的方法，其特征在于：步骤（3）所述催化反应温度是37℃，pH为7。