[发明专利]人自身免疫性疾病溃疡性结肠炎诊断试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫分析领域诊断试剂盒技术领域，尤其是涉及一种人自身免疫性疾病溃疡性结肠炎诊断试剂盒及其制备方法。通过鉴别、诊断获取抗体信息，研发针对靶点的生物大分子药物，并对患者开展个性化诊疗及用药。

背景技术

炎症性肠病(IBD)是一组病因尚不十分明确的慢性非特异性肠道炎症性疾病，主要包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)两个相对独立的疾病。IBD在西方国家多见，亚洲国家的发病率和患病率低于西方，但近年来呈明显上升趋势。我国IBD发病率也逐年增高，其中UC最多，危重病例也逐渐增多。

该病的发病原因目前仍在研究之中。从病理学上看，炎症性肠病被认为是由于人体的免疫系统对一些胃肠道细菌的过度免疫反应所造成的自身免疫性损伤。临床上主要表现为不明原因的腹泻，以及发烧，腹痛，直肠出血等。随着病情的发展，有些病人还出现不同程度的肠道外症状(如肝脏方面的疾患，关节炎，皮肤和眼睛方面的症状)。炎症性肠病发生在各个人群的不同年龄段。在过去的几十年里，炎症性肠病在全球的发病率呈逐渐上升的趋势。据不完全的估计，目前在我国的发病总人数约在一百万左右，其中溃疡性结肠炎占得比率较高。临床上对炎症性肠病的治疗主要包括了手术和药物治疗。但炎症性肠病在治疗后常有反复，许多病人需要反复多次的手术治疗。除了疾病本身对病人造成痛苦以外，心理压力和经济负担也很大。

炎症性肠病的诊断和鉴别诊断对于治疗方案的决定至关重要。传统上对炎症性肠病的诊断和对克罗恩病与溃疡性结肠炎的鉴别诊断主要是依赖X光和内窥镜检查，并通过活检来确诊。实验室的检测仅限于一些非特异性方法，如C-反应蛋白的检测和对血细胞的计数。这些指标特异性差，诊断参考价值有限。正因为如此，临床上需要一个更为特异的简单和低价的体外检测手段。天津瑞华生物科技有限公司开发了一个全新的有自主知识产权的体外诊断炎症性肠病的方法。从原理上说这些标识物的存在和在血液中含量的升高提示了体内特异免疫反应的升高。而这些特异免疫反应的升高与炎症性肠病，包括克罗恩病与溃疡性结肠炎的发病和发展有密切的相关性。

临床研究报告表明炎症性肠病(IBD)患者血清中抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)对IBD诊断和鉴别诊断有很重要的临床意义。通过对病患血清中ANCA抗体的监测，可以给临床医生提供免疫抑制治疗的参考依据，并通过抗体的有无以及抗体含量的高低，对病患进行与普通验证的区别和对确诊病例进行临床治疗的跟踪监测。

发明目的

本发明的目的是提供一种检测对炎症性肠病溃疡性结肠炎特异的的血清标识物的免疫分析测定方法和依据该方法制备的检验试剂盒，及一种针对特异靶点的生物大分子药物的研发。(1)测定内容的独特性和专有性：目前在中国所要检测的全部标识物都属创新产品，而针对标识物所开发的炎症性肠病体外诊断试剂也是目前中国体外诊断试剂市场中在炎症性肠病方面唯一的产品。(2)测定试剂盒的灵敏性，特异性，重复性，和可靠性：该方法灵敏，特异并且重复性好，测定结果可靠性强。可以在血清反应很低时或者在疾病发生发展的早期阶段测到待测物。与其他一些非特异炎症测试方法不同，本测试方法能够可靠地检测炎症性肠病溃疡性结肠炎特有的血清标识物。(3)测定试剂盒的临床应用价值：瑞华生物科技有限公司对炎症性肠病标识物的检测技术包含了对标识物的检测以及在测定过程中结合免疫荧光技术可以鉴别靶抗原的类型。这些检测结果可协助医生对炎症性肠病的诊断，同时这些结果对治疗预后和治疗监控也提供了重要的参考价值。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

人自身免疫性疾病溃疡性结肠炎诊断试剂盒，其特征是：所述的试剂盒包括：

待检测血清标识物的标准品；

包被有标识物特异抗原系统的固相板；

联接有辣根过氧化酶的标识物的抗体；

洗涤液；

辣根过氧化酶底物的溶液；

终止液。

优选的方案为标识物为抗人中性粒细胞抗原免疫球蛋白G。

优选的方案为联接有辣根过氧化酶的标识物的抗体为抗非人类免疫球蛋白G抗体。

优选的方案为的辣根过氧化酶底物的溶液包含A液和B液，其中A液为过氧化氢溶液，B液为四甲基联苯胺溶液或者A液为四甲基联苯胺，B液为醋酸钠/枸橼酸缓冲液。

优选的方案为辣根过氧化酶连接抗体的采用碘酸钠法制备。

优选的方案为洗涤液为磷酸盐缓冲液。

优选的方案为终止液为硫酸。