[发明专利]一种快速、高效观察山茶属植物花粉管的荧光显微方法

权利要求书

1.一种观察山茶属植物花粉管的荧光显微方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）解剖分离待观察山茶属植物的雌蕊材料至操作单位；

（2）将分离后的材料依次浸泡在NaClO和NaOH溶液中，直到材料透明且软化，再经水溶性苯胺蓝染液染色，采用“双载玻片贴合两面观察法”制片后，进行花粉管荧光显微观察。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，若所述雌蕊材料为花柱，操作单位是一根独立的花柱；若所述雌蕊材料为子房，操作单位是一列或一个着生在胎座上的胚珠。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，花柱解剖分离时，从花柱基部整齐切除子房，得到一根独立的花柱；子房解剖分离时，从花柱基部整齐切除花柱、果柄，留下子房，刮去子房壁，从中轴处切下每个心室，再根据每个心室内胚珠着生的方位继续切分，若胚珠左右对称着生，则从中间对称切开，使胚珠尽可能多的保留在胎座上，若胚珠不规则着生，则以单个胚珠的方式分离，使胚珠尽可能多地保留在胎座上。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中NaClO溶液的有效氯含量为8000-10000mg/L，NaOH溶液浓度为7-9mol/L。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中水溶性苯胺蓝染液质量浓度为0.2-0.3%。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中载玻片厚度为0.8-1.5mm。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中材料先在NaClO溶液中浸泡2-3h，水洗后再在NaOH溶液中浸泡2-3h，水洗后在水溶性苯胺蓝染液染色6-8h，制片观察。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤（2）为：将解剖分离后的材料经各级酒精复水，在NaClO溶液中浸泡2h，蒸馏水洗3遍后在NaOH溶液中浸泡2h，蒸馏水洗3遍且流水洗30min后，在水溶性苯胺蓝染液中染色6h，制片观察。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述“双载玻片贴合两面观察法”进行制片观察的方法为：取一载玻片A，将水溶性苯胺蓝染液染色后的材料置于其上，在材料周围滴加水溶性苯胺蓝染液，取另一规格相同的载玻片B，轻盖于材料上，使两块载玻片处于贴合状态，采用“载玻片A+材料+载玻片B”的组合模式，不经压片，进行观察。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，制片时要排净两块载玻片之间染液中的气泡，使染液和材料处于紧密贴合状态。