[发明专利]一种血液DNA的快速提取方法无效

专利信息
申请号: 201310235099.9 申请日: 2013-06-14
公开(公告)号: CN103289990A 公开(公告)日: 2013-09-11
发明(设计)人: 秦炜;毕婷婷;陈标榜;余向东 申请(专利权)人: 浙江世纪康大医疗科技有限公司
主分类号: C12N15/10 分类号: C12N15/10
代理公司: 杭州求是专利事务所有限公司 33200 代理人: 杜军
地址: 311215 浙*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 一种 血液 dna 快速 提取 方法
【权利要求书】:

1. 一种血液DNA的快速提取方法,其特征在于该方法包括以下步骤:

步骤(1).细胞裂解分离:

在全血样本中加入细胞洗涤液,其中全血样本与细胞洗涤液的体积比为5:14,颠倒混匀样本,常温孵育5~10min,常温下13000~16000g转速离心1分钟,弃上清,得到残留细胞团;

步骤(2).消化沉淀:

取20~30ul上述步骤(1)所得的残留细胞团,然后依次加入15ul体积分数为10﹪的十二烷基硫酸钠SDS、15ul浓度为8M的醋酸铵、600ul浓度为5M的盐酸胍、3ul浓度为20mg/ml的蛋白酶K,60℃水浴15~30分钟后,冰浴冷却至常温,然后在4~8℃下13000~16000rpm/min转速离心2~3min,得到离心后的上清液,该上清液为DNA抽提液;

步骤(3).纯化:

将上述步骤(2)所得的DNA抽提液加入到2ml Eppendorf管中的纯化柱中,常温孵化2~5分钟,充分结合DNA,经纯化柱吸附后,离心分离,得到沉淀物;将沉淀物经硅胶膜洗涤液洗涤两次,离心分离,去除纯化柱中残存的硅胶膜洗涤液,得到洗涤后的沉淀物;然后再洗涤后的沉淀物中加入TE缓冲液,溶解洗脱DNA后,离心分离,去除沉淀,得到含DNA的保存液。

2.如权利要求1所述的一种血液DNA的快速提取方法,其特征在于步骤(1)所述的细胞洗涤液为浓度为20mM的Tris-HCl溶液,pH值为7.6。

3.如权利要求1所述的一种血液DNA的快速提取方法,其特征在于步骤(3)所述的硅胶膜洗涤液为10mM Tris-HCl、1mM乙二胺四乙酸EDTA、20mM NaCl、体积分数为50﹪乙醇的混合液。

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