[发明专利]一种以两歧双歧杆菌为主的微生态制剂

权利要求书

1.一种以两歧双歧杆菌为主的微生态制剂的制备方法包括以下步骤：

   （1） 菌种的活化与增值：

本发明采用两歧双歧杆菌、植物乳杆菌和嗜热链球菌作为发酵菌种，菌种均购于中国微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏编号分别是：两歧双歧杆菌CICC21712，植物乳杆菌ACCC11016，嗜热链球菌ACCC10651；从平板上挑取单菌落，分别接种到装有20mL MRS培养基（蛋白胨10.0 g，牛肉膏10.0 g，酵母膏5.0 g，柠檬酸氢二铵2.0 g，葡萄糖20.0 g，吐温80 1.0 mL，乙酸钠5.0 g，磷酸氢二钾2.0 g，硫酸镁0.58 g，硫酸锰0.25 g，蒸馏水1 000 mL，pH 6.2~6.6，高温高压灭菌）的试管中，37℃深层静置培养12~16小时，菌液以2%的接种量接种到装有适当体积MRS培养基的三角瓶中，37℃深层静置培养12~16小时备用，菌种活化一般1~3次；若培养基灭菌后未立即使用，则需在沸水浴中加热10min驱氧后使用；

   （2）配制发酵培养基：

培养基包括的原料及重量份数为：玉米粉40~70，小麦粉20~30，豆饼粉5~15，葡萄糖10~15，酵母浸出粉1~3，蛋白胨2~4，原料当以克计，蒸馏水相应以mL计的份数为800~1000，溶解，加入发酵罐内进行100~121℃，时间为10~30分钟的高温高压灭菌，在发酵罐降温至35~45℃时，加入无机盐0.7~1.5g/1000mL基料，无机盐选自CaCl₂ 、MgSO_4·7H₂O及MnSO₄·H₂O中的两种或者三种，为避免形成沉淀，在加入过程中搅拌均匀，然后加入液体石蜡至厚度为1~2cm；

   （3）控温发酵：分别接入液体种子的接种量为2~4%，搅拌均匀，起始pH 6.4，发酵过程中控制 pH 6.0~6.8，发酵温度控制在37~42℃，发酵12~14个小时，放罐，将混合菌培养物进行菌落计数，经过这样发酵的三种菌活菌体浓度均可达1.0~2.5×10¹⁰CFU/mL；

   （4）分别用植物淀粉吸附发酵液：以玉米粉、豆饼粉或小麦粉，或者其任意组合，作为发酵液的吸附剂；

   （5）将植物淀粉吸附的混合菌发酵液混合物进行烘干干燥，粉碎，两歧双歧杆菌、植物乳杆菌和嗜热链球菌培养物的用量比为50-80∶10-30∶10-30混合均匀，制成用于畜禽养殖的微生态饲料添加剂。

2.根据权利要求1所述的以两歧双歧杆菌为主的微生态制剂，其特征在于所述的培养基：玉米粉40~70，小麦粉20~30，豆饼粉5~15，葡萄糖10~15，酵母浸出粉1~3，蛋白胨2~4，原料当以克计，蒸馏水相应以mL计的份数为800~1000，溶解，加入发酵罐内进行100~121℃，时间为10~30分钟的高温高压灭菌，在发酵罐降温至35~45℃时，加入无机盐0.7~1.5g/1000mL基料，无机盐选自CaCl₂ 、MgSO_4·7H₂O及MnSO₄·H₂O中的两种或者三种，为避免形成沉淀，在加入过程中搅拌均匀。

3.根据权利要求1所述的以两歧双歧杆菌为主的微生态制剂，其特征在于：培养温度为37~42℃。

4.根据权利要求1所述的以两歧双歧杆菌为主的微生态制剂，其特征在于：种子菌接种量为2~4%的接种量。

5.根据权利要求1所述的以两歧双歧杆菌为主的微生态制剂，其特征在于：所用的菌种为双歧杆菌属的两歧双歧杆菌种、乳杆菌属的植物乳杆菌种和链球菌属的嗜热链球菌种，制剂中三种菌粉质量比依次为50-80∶10-30∶10-30。

6.根据权利要求1所述的以两歧双歧杆菌为主的微生态制剂，其特征在于：作为饲料添加剂应用于畜禽养殖。