[发明专利]一种微乳液制备聚糖-阴离子多糖复合物纳米微球的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种微乳液制备聚糖-阴离子多糖复合物纳米微球的方法。

背景技术

蛋白质药物经口服后被胃酸水解及胃肠道内的酶催化降解、也不易透过胃肠道粘膜等障碍，导致其生物有效性极低。为了成功地经口服输送蛋白质药物，必须将蛋白质药物保护起来以抵制胃内的苛刻环境，避免蛋白质药物的水解和酶降解，同时还需要增加蛋白质药物对肠道粘膜的渗透性。

一些合成的高分子聚合物如聚乳酸、聚2-含氧酸等被用来包埋蛋白质药物，但高分子的合成需要苛刻的环境，容易造成蛋白质药物的变性；而且合成的聚合物在胃液中不稳定，很难透过粘液屏障，生物相容性较低，具有免疫原性且不能被生物降解，实际应用中受到限制。

近年来，壳聚糖作为潜在的吸附增强剂能使多肽类药物通过粘膜上皮细胞受到广泛的注意。壳聚糖通过打开上皮细胞连接区（epithelial tight junctions）而起到渗透增强剂的作用。壳聚糖能增强通过细胞的吸附途径，这对于输送亲水性药物如治疗性的多肽、蛋白质和反义寡核苷酸通过细胞膜很重要。这种渗透增强效应的基本机制可能是高分子的正电荷作用于细胞膜，使连接区相关的蛋白质结构重组。由于壳聚糖在酸性条件下很容易溶解及很强的亲水性，对蛋白质药物的控制释放能力有限。但将壳聚糖和阴离子多糖（如卡拉胶、海藻酸钠等）溶液混合时，多糖的阴离子和壳聚糖的氨基发生离子相互作用形成高分子电解质复合物，壳聚糖在低pH时易溶解的性质被该条件下阴离子胶体网络抑制，而在高pH时，阴离子多糖的溶解作用又被该条件下不溶的壳聚糖抑制。这种复合作用可以制备壳聚糖-阴离子多糖凝聚物的药物载体。

当前，以壳聚糖与阴离子多糖的静电复合物作为口服蛋白质药物或其他活性成分的载体的制备技术主要是采用将两种溶液混合搅拌的方法制备复合载体粒子，该方法的缺陷是制得的粒子粒径较大（微米以上），粒径分布范围极广，粒子形状不规则，从而限制了蛋白质药物的释放。

发明内容

本发明目的在于提供一种壳聚糖与其他天然阴离子多糖形成的静电复合物纳米微球载体，该载体平均粒不超过300nm，粒径分布高度均一，该载体可用于口服蛋白质药物、基因药物、食品天然活性产物的肠道靶向输送。

本发明采用一种安全低毒的食品级水/油微乳液体系制备多糖复合纳米微球。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：发明提供了一种微乳液制备聚糖-阴离子多糖复合物纳米微球的方法，采用水/油微乳液中壳聚糖和阴离子多糖之间以静电相互作用形成复合多糖纳米微球，先制备壳聚糖微乳液和阴离子多糖微乳液，再将壳聚糖微乳液和阴离子多糖微乳液混合搅拌制得，其中壳聚糖微乳液的油相为柠檬烯。

所述的多糖微乳液为油相-乳化剂混合相，所述乳化剂为Tween60。

所述的壳聚糖微乳液中还包括助乳化剂，所述助乳化剂为高级醇。优选地，所述的高级醇为乙醇、正丁醇、正己醇、正辛醇中的一种或几种。

所述的阴离子多糖为海藻酸钠、卡拉胶、低甲氧基果胶中的一种或多种。优选食品级的原料。

优选地，所述的壳聚糖的脱乙酰度＞90％。可以是高度脱乙酰化（脱乙酰度＞90％）的食品级壳聚糖。

本发明所提供的方法包括以下步骤：

（1）制备壳聚糖溶液：将壳聚糖溶解在pH2～3的酸（优选醋酸或盐酸）溶液中，再调节将pH值至4～5，过滤除掉不溶性的杂质；作为一种优选的方案，此步骤中还可以进一步包括：在壳聚糖溶液中添加钙离子，钙离子在溶液中的终浓度为0.01molL^-1～0.2molL^-1；优选添加氯化钙；

（2）制备阴离子多糖溶液：将阴离子多糖分散在水中，加热搅拌至完全溶解后，调pH值至4～5，过滤除去不溶性杂质；

（3）制备油相-乳化剂混合相：将柠檬烯和助乳化剂混合获得油相，然后加入乳化剂，制成油相-乳化剂混合相；

（4）分别制备壳聚糖微乳液和阴离子多糖微乳液：将步骤（1）的壳聚糖溶液在搅拌的同时滴入油相-乳化剂混合相中获得壳聚糖微乳液；将步骤（2）的阴离子多糖溶液在搅拌的同时滴入油相-乳化剂混合相中获得阴离子多糖微乳液。

（5）将步骤（4）所得的壳聚糖微乳液和阴离子多糖溶液混合，搅拌，离心后获得纳米粒子。