[发明专利]一种裸花紫珠脱毒微繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种裸花紫珠的组培快速繁殖的技术，本发明属于种子种苗、农业生物技术和药用植物栽培领域。

背景技术

裸花紫珠（Callecarpa. nudiflora Hook. et Arn）为马鞭草科紫珠属植物，以其干燥叶片入药，收载于《中国药典》1977 年版。具有止血散瘀、抗菌消炎之功效，是裸花紫珠片、裸花紫珠分散片、裸花紫珠胶囊、裸花紫珠颗粒、裸花紫珠栓等近40余种中成药的重要原料。由于裸花紫珠为重要的医药原料，野生资源破坏严重，采集野生资源已经不能满足生产需要，开展规范化生产是解决药材短缺的有效途径，而种苗繁育是规范化生产的重要组成部分，由于裸花紫珠果实成熟周期较长，种子成熟度不一，加上种子狭小，种皮坚硬，于是裸花紫珠种苗繁育周期较长，出苗不一致，远远不能满足市场的需要，这使裸花紫珠在我国境内的推广栽培和资源利用受到了极大的限制。

利用植物组织培养技术建立裸花紫珠脱毒微繁体系是生产优质裸花紫珠优质种苗的有效途径，其关键技术之一在于脱毒方法的建立、微枝培养、增殖培养和生根培养，不同激素组合及其浓度对此影响很大。CN102870678A公开了一种组织培养快速繁殖裸花紫珠的方法，通过利用扦插繁殖的裸花紫珠的新枝为外植体，进行接种培养、扩繁培养、生根培养、炼苗移栽。国内外尚未见到裸花紫珠果实外植体的组织培养、脱毒微繁等研究的报道，本专利通过对脱毒方法的建立、微枝培养、增殖培养和生根培养，建立了裸花紫珠种子外植体的脱毒微繁方法，为裸花紫珠种苗的工业化生产的奠定了基础。

发明内容

本发明的目的是为了解决裸花紫珠繁殖周期长、增殖效率低、成本高和遗传稳定性差的问题，而提供的一种低成本、稳定一致、增殖效率高的裸花紫珠脱毒微繁方法。

裸花紫珠的脱毒微繁方法按以下步骤实现：①外植体消毒，将清洗后的裸花紫珠果实外植体在超净工作台上用质量浓度为75%的乙醇溶液浸泡30～60s后，然后用无菌水冲洗3 ～5次，再用质量浓度为0.1%的氯化汞溶液消毒12～15min，然后用无菌水冲洗3～5次；②无菌苗培养，将种子从消毒后的果实外植体中剥离出，接种于以改良MS固体培养基为基本培养基，且还包含0.01~0.03mg/L的赤霉素、0.01~0.03 mg/L的NAA和质量浓度为2.5~3.0%的蔗糖，pH值为5.6～6.0的诱导培养基，然后在温度为25～28℃、湿度为70%～80%、光照强度为80～100 lx、光照8～10 h/d的条件下培养至无菌芽长度为0.5～1.0 cm；③微枝培养，将增生的无菌芽一起转接于以改良MS固培养基为基本培养基，且还包含质量浓度为0.5 ～1.0%的有机附加物，质量浓度为2.5~3.0%的蔗糖，pH值为5.6～6.0的壮苗培养基中，在温度为25～28℃、湿度为70%～80%、光照强度为50～70 lx、光照8～10 h/d的条件下培养至无菌芽生长长度为15.0～20.0 cm，即为微枝；④增殖培养，将增壮后的微枝切割成带有1个顶芽或1～2个腋芽、且长度为1.0 ～2.0 cm的茎段然后接种于以改良MS固培养基为基本培养基，且还包含0.5～0.8mg/L的6-BA、0.08～0.1 mg/L的NAA和质量浓度为2.5~3.0%的蔗糖，pH值为5.6～6.0的增殖培养基，在温度为25～28℃、湿度为70%～80%、光照强度为80～100 lx、光照8～10 h/d的条件下培养，视种苗需求数量可增殖25～30d；⑤生根培养，待微枝生长长度为2.0～3.0 cm，转接于以改良MS固体培养基为基本培养基且还含0.1%～1.0%活性炭或0.05～0.1 mg/L的NAA和质量浓度为2.5~3.0%的蔗糖，pH值为5.6～6.0的生根培养基中进行生根培养，在温度为25～28℃、湿度为70%～80%、光照强度为80～100 lx、光照8～10 h/d的条件下培养至裸花紫珠微枝根的生长长度为1.5～2.0 cm；⑥炼苗培养，将生根培养的裸花紫珠苗于隐蔽度为15%～20%的荫棚，炼苗7～10 d ；⑦将经过炼苗后裸花紫珠苗移栽于含10%～15%蛭石，10%～15%牛粪，10%～15%椰糠和55%～70%腐殖土的育苗杯，即完成裸花紫珠的脱毒微繁。

上述方案中，所述的改良MS固体培养基由1/2MS培养基，增加75.0~100.0 mg/L的肌醇制得。

作为本发明的优选方案，本发明中步骤②无菌苗培养为：将消毒后的裸花紫珠种子接种于以改良MS固培养基为基本培养基，且还包含0.01mg/L的赤霉素、0.01 mg/L的NAA和质量浓度为2.5~3.0%的蔗糖，pH值为5.6～6.0的诱导培养基。