[发明专利]一种杂交辣椒种子纯度检验的方法

权利要求书

1.一种杂交辣椒种子纯度检验的方法，其特征在于按下述步骤操作：

1）种子贮存蛋白提取液的提取：

A.将种子在丙酮溶液中浸泡5-6个小时脱脂处理后，取出晾干；

B.将种子单粒切成三块后放入离心管中并加入90ul的提取液；

所述提取液为由0.58gNaCL+20g蔗糖+蒸馏水制成100ml的溶液；

C.在5℃条件下放置12小时，提取上清液，即得种子贮存蛋白提取液；

2）置板、灌胶：将垂直板电泳槽玻璃板两侧用凡士林密封，加热琼脂糖封住底部；玻璃板之间加入22ml的分离胶；分离胶凝固后，再加入6ml的浓缩胶，插入样品梳；

所述分离胶由分离胶母液、分离胶缓冲液、Vc-FeSO₄溶液、水、过硫酸铵溶液按28ml：3ml:4ml：6ml：1.2ml构成；

所述浓缩胶由浓缩胶母液、浓缩胶缓冲液、Vc-FeSO₄溶液、水、过硫酸铵溶液按3.5ml：2.5ml：3ml：2ml：1.2ml构成；

所述分离胶母液为19.0g丙烯酰胺+0.76g甲叉双丙烯酰胺Bis+蒸馏水制成100ml的溶液；

所述分离胶缓冲液为PH3.2的1.647gNaCl+13.5ml乳酸+蒸馏水制成100ml的溶液；

浓所述缩胶母液为16.9g丙烯酰胺+2.13g甲叉双丙烯酰胺Bis+蒸馏水制成100ml的溶液；

所述浓缩胶缓冲液为1.714gNaCl+3.5ML乳酸+蒸馏水制成100ml的溶液；

所述Vc-FeSO₄溶液为0.48gVc+8mgFeSO₄+7H₂O+蒸馏水制成100ml的溶液；

所述过硫酸铵溶液为过硫酸铵1.141g+蒸馏水制成100ml的溶液；

3）浓缩胶凝胶后，拔去样品梳，每孔注入15ul的种子贮存蛋白提取液点样；

4）电泳：点样结束后，电泳采取稳流法和甲基蓝指示剂：电泳电流单板不超过50mA；

5）：取胶：甲基蓝指示剂全部跑出分离胶后结束电泳，取下胶片，切除浓缩胶及分离胶非有效观察区的部分，撬出一层分离胶；

6）染色：将撬出的一层分离胶置于1.4%浓度的考马斯亮蓝8ml+10%浓度的三氯乙酸400ml构成的染色液中进行染色至谱带出现；

7）条带清晰后，将分离胶清洗干净，采用常规方法制作干胶片，即获样品电泳谱带。

8）受检种子纯度检验：用上述方法分别获取标准电泳谱带和受检样品电泳谱带，将受检样品的电泳谱带与标准电泳谱带进行对照比较，即得受检样品种子的纯度。