[发明专利]一种利那洛肽的制备方法

说明书

本发明属于药物合成技术领域，公开了一种利那洛肽的制备方法，其在合成线性肽时，载体树脂采用Wang Resin，相对氯树脂性质较稳定、肽不易脱落。同时在合成线性肽时，肽序中六个半胱氨酸中的五个采用价格相对低廉的Fmoc‑Cys(Trt)‑OH作为反应原料，大大降低了合成成本，有利于工业化生产。此外，形成三个二硫键时，采用一步氧化法，直接将粗肽氧化，形成配对正确的三个二硫键，操作简便实用，收率高，成本低，有利于工业化生产。运用本发明的方法制备的利那洛肽，线性粗肽重量收率达到103.9%，纯度可达82.9%，精肽纯度稳定在99.12～99.30%之间，总收率达到32.15%。

技术领域

本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种利那洛肽的制备方法。

背景技术

利那洛肽，英文名称为Linaclotide；商品名称为Linzess；中文通用名称为利那洛肽。其为一种多肽药物，用于治疗成人慢性特发性便秘和便秘型肠易激综合征(IBS-C)，具体肽序如下式所示：

关于利那洛肽的制备方法，国内外报道较少。目前主要有中国专利CN102875655A描述的合成方法以及Miriam等人尝试的合成方法（“Optimized Fmo c Solid-PhaseSynthesis of the Cysteine-Rich Peptide Linaclotide”，Peptide Sci ence,2011,Volume96,Issue1,pages69-80）。

中国专利CN102875655A描述了利那洛肽的合成方法，其在合成线性肽树脂时全部采用Mmt作为Cys的侧链保护基团，三个二硫键的形成则采用GSH/GSSH体系的一步氧化方法。由于Fmoc-Cys(Mmt)-OH价格昂贵，因此全部采用Fmoc-Cys(Mmt)-OH作为反应原料来合成利那洛肽肽树脂，无疑增加了合成成本，不利于工业化生产。

Miriam等人报道的方法中分别采用了三种不同的方法进行利那洛肽的合成：（1）肽序中全部采用Trt为Cys保护基固相合成线性粗肽，然后在液相中室温一步氧化得到利那洛肽；（2）肽序中采用五种不同半胱氨酸保护基，即采用2StBu、2pMeOBzl、2Trt或2Mmt、2Acm、2Trt或2Acm、2Trt、2pMeOBzl共三种正交保护方式，进行固相合成线性粗肽，然后采用分步环化策略完成二硫键的合成；（3）肽序中采用两种不同半胱氨酸保护基，即采用2个StBu和4个Trt进行固相合成线性粗肽，然后采用分步环化策略完成二硫键的合成。

Miriam等人采用的方法中肽树脂采用了氯树脂，由于氯树脂的酸敏性，在偶联过程中会导致肽脱落，造成线性肽收率低。此外，该方法中的一个策略是，半胱氨酸全部采用Trt保护，由于Trt基团庞大，会影响偶联效果，导致最终线性肽纯度偏低，收率不高。同时，合成线性肽过程中使用了Fmoc-Cys(pMeOB zl)-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH及Fmoc-Cys(StBu)-OH，价格昂贵，大大增加了成本，不利于工业化生产，并且分步脱除各类保护基Acm、pMeOBzl和StBu容易造成大量杂质的产生，造成利那洛肽粗品纯度较低，不利于后续的纯化。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述缺陷，提供了一种成本低、操作简便、反应条件温和、有利于实现产业化的新型的利那洛肽制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种利那洛肽的制备方法，包括如下步骤：

1）Fmoc-Tyr(tBu)-OH和载体树脂反应，获得Fmoc-Tyr(tBu)-树脂；

2）Fmoc-Tyr(tBu)-树脂采用逐一偶联的方式偶联Fmoc保护基团的其他氨基酸，获得利那洛肽肽树脂；

3）利那洛肽肽树脂经裂解反应，获得利那洛肽粗肽；