[发明专利]一种利那洛肽的制备方法

权利要求书

1.一种利那洛肽的制备方法，包括如下步骤：

1)Fmoc-Tyr(tBu)-OH和载体树脂反应，获得Fmoc-Tyr(tBu)-树脂；

2)Fmoc-Tyr(tBu)-树脂采用逐一偶联的方式偶联Fmoc保护基团的其他氨基酸，获得利那洛肽肽树脂；

3)利那洛肽肽树脂经裂解反应，获得利那洛肽粗肽；

4)利那洛肽粗肽中的三个二硫键经环化后，再经纯化和冻干，获得利那洛肽；

其特征在于，步骤2)偶联时肽序中第5位半胱氨酸、第6位半胱氨酸或者第10位半胱氨酸采用Fmoc-Cys(Mmt)-OH，其余半胱氨酸均采用Fmoc-Cys(Trt)-OH。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤1)中的载体树脂为Wang Resin。

3.根据权利要求2所述的方法，其中Wang Resin的替代度为0.5～1.0mmol/g。

4.根据权利要求2所述的方法，其中Wang Resin的替代度为0.7mmol/g。

5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)所述的Fmoc保护基团的其他氨基酸依次为Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Cys(Mmt)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH和Fmoc-Cys(Trt)-OH。

6.根据权利要求1所述的方法，其中步骤2)中逐一偶联的方式采用的偶联试剂为HOBt/DIC或HOBt/PyBop/DIPEA或HATU/HOAt/DIPEA。

7.根据权利要求1所述的方法，其中步骤3)中裂解试剂的用量为15mL/g树脂，裂解试剂为三氟乙酸TFA、苯甲硫醚、苯酚、1,2-乙二硫醇EDT、水和三异丙基硅烷TIS的混合试剂。

8.根据权利要求7所述的方法，其中裂解试剂中各组分的体积百分含量为TFA：70～75％，苯甲硫醚：5～8％，苯酚：5～8％，TIS：3～6％，EDT：5～10％，余量为水。

9.根据权利要求7所述的方法，其中裂解试剂中各组分的体积比为TFA：苯甲硫醚：苯酚：水：EDT：TIS＝75：5：5：5：8：2。

10.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)中环化三个二硫键的缓冲体系为100～300mmol/L磷酸二氢钠、10～50mmol/L盐酸胍和50～100mmol/L醋酸铵的水溶液，缓冲体系pH为7.8；采用的氧化试剂为5～30％DMSO及1～5mmol/L EDTA。

11.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)中环化三个二硫键的缓冲体系为100mmol/L磷酸二氢钠、20mmol/L盐酸胍和50mmol/L醋酸铵的水溶液；氧化剂为10％DMSO及2mmol/LEDTA。

12.根据权利要求1所述的方法，步骤4)中环化三个二硫键的反应时间为8～15小时。

13.根据权利要求1所述的方法，步骤4)中环化三个二硫键的反应时间为10小时。

14.根据权利要求1所述的方法，其中步骤4)所述的纯化为反相高效液相色谱纯化。

15.根据权利要求14所述的方法，其中反相高效液相色谱纯化中，流动相A相为常规的0.1％TFA/水，流动相B相为乙腈。