[发明专利]一种肽醛的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种肽醛的制备方法。

背景技术

肽醛是指C端为醛基的多肽类似物，主要作为丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶以及金属蛋白酶等四类蛋白水解酶的抑制剂。对于丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶，肽醛通过与丝氨酸或半胱氨酸残基活性位点结合形成半缩醛或半硫缩醛，发挥蛋白酶抑制作用。对于天冬氨酸和金属蛋白酶，肽醛与其键合形成水合物来达到抑制作用。上述肽醛的蛋白酶抑制作用都是通过与蛋白酶活性位点形成稳定的类四面体结构，从而阻止了蛋白底物与酶的结合。随着人们对药物研究的表明，含有氨基醛的多肽在很多疾病中表现出很好的生理作用，因此发展低成本、高收率、易操作的合成氨基醛的方法有着十分重要的经济价值。

醛基作为一类特殊的化学官能团，在有机化学反应中扮演者重要的角色。基于醛自身的化学特性，一方面醛基不稳定，很容易被氧化成羧基或者被还原成醇羟基，另一方面醛基在酸性或碱性条件下都容易发生缩合反应，导致醛的合成在化学合成工艺中一直是个难点。

目前肽醛的制备方法主要分为液相法和固相法两类。

（1）液相法。主要有还原法和氧化法制得肽醛。此类方法主要参见以下文献：J.Med.Chem.,1998,41,4301-4308；J.Med.Chem.,1998，41，2786-2805等。液相法存在的主要问题是中间产物分离麻烦，制备周期长，由于醛基的不稳定带来的后处理困难等。

（2）固相法。相对于液相法，固相法存在制备简便、周期短的优势，更符合快速制备肽醛的要求。固相法目前主要包括还原法、氧化法和水解法。此类方法主要参见以下文献：Tetrahedron.Lett,1995，36，7871-7874；J.Com.Chem,2000,2,172-181；Tetrahedron.Lett,1997,38,7749-7742；Tetrahedron Lett，1997，38，7119-7122。当前固相法中存在的主要问题是缺乏合适的连接臂将氨基醛固载化到固相载体上，反应条件较苛刻、易消旋，产率低。

中国专利CN 102329372A采用了一种新的连接臂二乙醇胺，提供了一种简便、高效的肽醛制备方法，解决了目前肽醛制备工艺繁琐、周期长、产率低的问题。但其在生产实践中仍然存在可使用的氨基酸范围有限以及有紧邻消旋杂峰存在的缺陷，影响后续纯化。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的上述缺陷，惊奇地发现二乙醇胺的同系物二丙醇胺和二丁醇胺都可以非常好地作为连接臂，用于肽醛的固相合成。因此，本发明提供了一种操作简便，氨基酸适用范围更广、产率高、低消旋的新型的肽醛的制备方法。

为此，本发明一方面提供了一种肽醛的制备方法，其依次包括制备保护的氨基醛、制备氨基醛连接臂、制备肽醛-树脂复合物和切割纯化得到肽醛纯品的步骤。在制备氨基醛连接臂时，所采用的连接臂为二丙醇胺或二丁醇胺。

在本发明的方法中，制备保护的氨基醛步骤中所采用的保护的氨基酸为N-(9-芴甲氧羰酰基)-氨基酸，氨基酸为20种常见氨基酸。针对20种常见的保护氨基酸，在制备保护的氨基醛时，按照其是否有侧链保护基而采用不同的合成方法。

其中针对侧链具有保护基的氨基酸而言（以制备Fmoc-Asp(OtBu)-H为例），具体步骤如下：

1、在氩气保护的条件下，以干燥的四氢呋喃做反应溶剂，-20℃～-10℃的低温条件下加入Fmoc保护的侧链具有保护基的氨基酸及1.2eq氯代甲酸异丁酯、1.2eq DIPEA进行搅拌反应。反应结束后过滤除去不溶物，将滤液直接在-10℃低温条件下加入2.1eq硼氢化钠进行还原，得到白色固体。

2、在氩气的保护条件下，以乙酸乙酯为溶剂，将上一步得到的白色固体溶解完全后，再加入1eq IBX在40℃反应，最后得到Fmoc保护的侧链具有保护基的氨基醛。

而针对侧链不具有保护基的氨基酸而言（以制备Fmoc-Phe-H为例），具体步骤如下：

1、以DCM为溶剂，加入1eq Fmoc保护的侧链不具有保护基的氨基酸、1eq HBTU、3eq DIPEA，及1.2eq N,O-二甲基羟胺盐酸盐，反应结束经过洗涤后处理，得到Fmoc保护的weinreb酰胺粗品。