[发明专利]温敏性固定化木瓜蛋白酶及其在制备单克隆抗体中的应用无效
| 申请号： | 201310221532.3 | 申请日： | 2013-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN103275961A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 应国清;易喻;黄婷婷;梅建凤;王鸿;陈建澍;张彦璐 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C12N11/08 | 分类号： | C12N11/08;C12P21/08;C12P21/06 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;冷红梅 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 温敏性 固定 木瓜蛋白酶 及其 制备 单克隆抗体 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种温敏性的固定化木瓜蛋白酶，由如下方法制备得到：
（1）将DMF用分子筛干燥，温敏性载体溶于干燥过的DMF中，温敏性载体与DMF的比例是1g：1～10mL，得到载体溶液；所述温敏载体为N-羟基琥珀酰亚胺酯封端的聚（N-异丙基丙烯酰胺）；
（2）将木瓜蛋白酶溶于pH7.5～10.0的硼酸盐缓冲液中，调酶液浓度至1～10mg/mL，得到酶溶液；
（3）将载体溶液与酶溶液以1：4～6体积比混合，于4～55℃反应1～8h，反应液用pH7.5～10.0的硼酸盐缓冲液稀释；
（4）40℃空气浴中，11000r/min离心20min，除去上清液，沉淀用磷酸盐缓冲液溶解，再于相同条件下离心；
（5）重复步骤（4）的操作2～3次，最后所得沉淀溶于新配的磷酸盐缓冲液中，4℃保存，即得温敏性的固定化木瓜蛋白酶溶液。
2.如权利要求1所述的温敏性的固定化木瓜蛋白酶在制备单克隆抗体片段中的应用。
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