[发明专利]胆固醇含量分析样品制备和胆固醇含量的自动分析方法

说明书

技术领域

本发明属胆固醇含量检测术领域，特别涉及油脂中胆固醇的提取方法及胆固醇含量的自动分析方法。 

背景技术

胆固醇（Cholesterol）是一种环戊烷多氢菲的衍生物。胆固醇作为一种营养素具有重要的生理功能，但是长期大量摄入，可能加大患动脉粥样硬化、高血压和冠心病等心血管疾病的风险。 

目前，油脂的营养价值、品质和质量越来越受到消费者的重视。油脂中胆固醇的含量可作为鉴定油脂营养价值和品质的一个重要指标，检测油脂中胆固醇的含量也是鉴别地沟油的重要手段之一。而目前，在检测油脂中胆固醇含量的过程中，样品前处理采用油脂皂化处理步骤繁琐、样品处理时间长、溶剂用量大，提取率低；皂化法提取精度仅达95%，有5%的胆固醇难以提取，即有5%的误差；皂化法提取胆固醇需要3小时以上。 

目前检测胆固醇含量方法中分光光度计法操作繁琐、手动添加试剂、人为操作误差大，且耗时。高效液相色谱和气相色谱等设备费及运行成本高。现在测定胆固醇的分光光度法精度仅能达到2%，分光光度法的分析时间需要1h。 

发明内容

本发明提供了精确度更高、时间更短的从油脂中提取胆固醇试样的方法，以及精确度更高、时间更短的胆固醇含量自动分析方法。 

本发明所述油脂中胆固醇的提取方法，使用硅胶固相萃取小柱的型号为DIKMA ProElut SI进行固相萃取法。 

油脂中胆固醇含量分析样品的制备方法，包括如下步骤： 

（1）将油脂充分混匀后取0.5g～1.5g，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，涡旋混匀后得到油脂溶液；

（2）将油脂溶液加入硅胶固相萃取小柱，从该小柱的底部孔弃去流出液；再用体积比为正己烷:乙醚=98:2的淋洗液5mL～10mL加入到硅胶固相萃取小柱中，从该小柱的底部孔弃去流出液；最后用体积比为正己烷:乙醚=92:8的淋洗液20mL～50mL加入到硅胶固相萃取小柱中，从该小柱的底部孔收集流出液备用；

（3）将上述（2）步骤的备用收集流改于旋转蒸发仪干燥，转蒸发仪在真空度300KPa～500KPa，温度为40℃～50℃条件下将所述的收集流浓缩至10μL～50μL，将浓缩的收集流与5mL～10mL显色液溶解制得胆固醇分析样品；所述的显色液是重量/体积比为邻苯二胺（g）：冰乙酸（L）=0.03g/L～0.06g/L的溶液。

本发明所述的胆固醇含量分析方法是采用流动注射自动分析法，流动注射自动分析方法使用包括有样品流路、推动液流路、显色液流路、低压泵P、进样阀V、进样环C₀、冷却反应器L、反压圈Y、三通混合器M、分析流路、光学流通池F、光学检测器D和计算机处理系统PC的分析仪器。 

关于正己烷：乙醚=98:2（V:V=98:2）淋洗液的用量与淋洗效果：在已知胆固醇含量（300mg/kg）的油脂中提取胆固醇含量，称取油脂质量为1.0g的五个试样，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，涡旋混匀后分别得到五个油脂溶液；淋洗液正己烷：乙醚=98:2（V:V=98:2）分别采用五个不同的体积为5mL、10mL、15mL、20mL、30mL，用五个淋洗液分别对五个油脂溶液淋洗；洗脱液中检测出胆固醇的量变化很大，如下，说明用5mL～10mL不同体积的淋洗液对试样淋洗可分离出胆固醇，即保留胆固醇在硅胶固相萃取小柱中，等待用专门洗脱胆固醇的淋洗液洗脱。 

用5mL（V:V=98:2）淋洗液的未检出胆固醇； 

用10mL（V:V=98:2）淋洗液的未检出胆固醇；

用15mL（V:V=98:2）淋洗液的检出胆固醇含量为2.5mg/L；

用20mL（V:V=98:2）淋洗液的检出胆固醇含量为4.0mg/L；

用30mL（V:V=98:2）淋洗液的检出胆固醇含量为6.0mg/。

但用20mL～50mL正己烷:乙醚=92:8（V:V=92:8）的淋洗液加入到已经用5mL～10mL正己烷:乙醚=98:2（V:V=98:2）淋洗过的硅胶固相萃取小柱中洗脱胆固醇，洗脱即提取胆固醇的量高达98.38%，则提取胆固醇试样的精度高达1.62%。 

油脂中胆固醇含量的测定方法，包括如下步骤： 

（1）溶解：将油脂充分混匀后取0.5g～1.5g，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，涡旋混匀后得到油脂溶液；