[发明专利]胆固醇含量分析样品制备和胆固醇含量的自动分析方法

权利要求书

1.油脂中胆固醇含量分析样品的制备方法，包括如下步骤：

（1）将油脂充分混匀后取0.5g～1.5g，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，涡旋混匀后得到油脂溶液；

（2）将油脂溶液加入硅胶固相萃取小柱，从该小柱的底部孔弃去流出液；再用体积比为正己烷:乙醚=98:2的淋洗液5mL～10mL加入到硅胶固相萃取小柱中，从该小柱的底部孔弃去流出液；最后用体积比为正己烷:乙醚=92:8的淋洗液20mL～50mL加入到硅胶固相萃取小柱中，从该小柱的底部孔收集流出液备用；

（3）将上述（2）步骤的备用收集流改于旋转蒸发仪干燥，转蒸发仪在真空度300KPa～500KPa，温度为40℃～50℃条件下将所述的收集流浓缩至10μL～50μL，将浓缩的收集流与5mL～10mL显色液溶解制得胆固醇分析样品；所述的显色液是重量/体积比例为邻苯二胺（g）：冰乙酸（L）=0.03g/L～0.06g/L的溶液。

2.油脂中胆固醇含量的测定方法，包括如下步骤：

（1）溶解：将油脂充分混匀后取0.5g～1.5g，加入5mL～15mL正己烷至油脂被完全溶解，涡旋混匀后得到油脂溶液；

（2）萃取：将油脂溶液加入硅胶固相萃取小柱，从该小柱的底部孔弃去流出液；再用体积比为正己烷:乙醚=98:2的淋洗液5mL～10mL加入到硅胶固相萃取小柱中，从该小柱的底部孔弃去流出液；最后用体积比为正己烷:乙醚=92:8的淋洗液20mL～50mL加入到硅胶固相萃取小柱中，从该小柱的底部孔收集流出液备用；

（3）浓缩并作色：将上述（2）步骤的备用收集流改于旋转蒸发仪干燥，转蒸发仪在真空度300KPa～500KPa，温度为40℃～50℃条件下将所述的收集流浓缩至10μL～50μL，将浓缩的收集流与5mL～10mL显色液溶解制得胆固醇分析样品；所述的显色液是重量/体积比为邻苯二胺（g）：冰乙酸（L）=0.03g/L～0.06g/L的溶液；胆固醇分析样品作为下述流动注射自动分析仪测定中的试样S；

（4）测基线：将流动注射自动分析仪设置在进样状态，进样阀V设置在分析状态；在低压泵P的作用下，反应液R经显色液流路，推动液C经推动液流路后，使反应液R和推动液C在三通混合器M相混合形成混合液，反应液R和推动液C的混合液经冷却反应器L进入光学流通池F，经光学检测器D将反应混合液特征的信号传输给计算机处理系统PC处理，得到基线；在基线测绘的同时，使试样S经样品流路和进样阀V进入进样环C₀并将进样环充满； 

（5）测试样：将流动注射自动分析仪转换至分析状态，使进样环C₀中的试样S在推动液C的推动下进入分析流路，使试样S进入分析流路；在分析流路中，试样S与反应液R在三通混合器M混合后，在冷却反应器L中发生反应，在此过程中形成有色物质，继而该有色物质进入光学流通池F，经光学检测器D将该有色物质特征的信号传输给计算机处理系统PC处理，得到试样谱图。

3.根据权利要求2所述的油脂中胆固醇含量的测定方法，其特征在于，所述的硅胶固相萃取小柱型号为DIKMA ProElut SI，在6mL的试管中有 500mg固体硅胶粉；所述的冷却反应器L是内径为1.0mm聚四氟乙烯螺旋状盘管，冷却方式为循环水冷却；所述的反压圈Y为内径为0.5mm聚四氟乙烯螺旋状盘管，光学检测器D的检测波长为412nm。