[发明专利]一种家蚕抗菌肽attacin2及其异源表达和应用

权利要求书

1.一种家蚕抗菌肽attacin2的编码基因，其特征在于，所述编码基因的碱基序列如SEQ ID No:1所示。

2.根据权利要求1所述的家蚕抗菌肽attacin2的编码基因，其特征在于，对所述编码基因进行PCR扩增使用的引物序列为：

attacin2-28a-F：5’-CAT GCC ATG GGC CAA GCC GGC AGC TTC ACA GT-3’

attacin2-28a-R：5’-CCG CTC GAG TTA ATG ATG ATG ATG ATG ATG GAA GAA TTT AGA GAA GGA GA-3’。

3.一种家蚕抗菌肽attacin2的重组载体，其特征在于，所述重组载体包含如SEQ ID No:1所示的家蚕抗菌肽attacin2的编码基因。

4.一种含有重组载体的BL21菌株，其特征在于，所述重组载体包含如SEQ ID No:1所示的家蚕抗菌肽attacin2的编码基因。

5.一种家蚕抗菌肽attacin2，其特征在于，具有如SEQ ID No:4所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求5所述的家蚕抗菌肽attacin2，其特征在于，所述家蚕抗菌肽attacin2为成熟肽，所述成熟肽的家蚕抗菌肽attacin2的N端包含6个组氨酸构成的检测标签。

7.一种家蚕抗菌肽attacin2的生产方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取家蚕抗菌肽attacin2的编码基因；

构建重组载体：将家蚕抗菌肽attacin2的编码基因的PCR扩增产物连接到pMD18-T克隆载体中，构建得到重组质粒pMD18-attacin2；分别酶切重组质粒pMD18-attacin2和原核表达载体pET28a，构建得到包含家蚕抗菌肽attacin2的编码基因的重组载体pET28a-attacin2；

表达家蚕抗菌肽attacin2：将重组载体pET28a-attacin2转化至BL21菌株中，利用IPTG诱导后收集包含家蚕抗菌肽attacin2的菌液。

8.根据权利要求7所述的家蚕抗菌肽attacin2的生产方法，其特征在于，所述方法还包括：

破碎BL21菌株，采用尿素溶液处理离心破碎后的细胞菌液，随后离心并收集沉淀，获得的上清加样于组氨酸蛋白纯化柱上，洗脱后获得纯化的家蚕抗菌肽attacin2；

以及纯化的家蚕抗菌肽attacin2经PBS透析复性，并经冷冻干燥制得粉末态的所述家蚕抗菌肽attacin2。

9.一种家蚕抗菌肽attacin2在抑制黑胸败血病菌、粘质沙雷氏菌、大肠杆菌和金黄葡萄球菌的生长中的应用。