[发明专利]K99-987P-F41重组蛋白及其应用无效
| 申请号： | 201310218959.8 | 申请日： | 2013-06-05 |
| 公开（公告）号： | CN103275228A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 倪宏波;郎秀艳;张洋龙;邢思疑;蒋慧婷;刘娇 | 申请（专利权）人： | 黑龙江八一农垦大学 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61K39/116;A61K39/108;A61P31/04 |
| 代理公司： | 大庆市建华专利事务所 23119 | 代理人： | 孙薇 |
| 地址： | 163319 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | k99 987 f41 重组 蛋白 及其 应用 | ||
1.一种K99-987P-F41重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
2.编码权利要求1所述的K99-987P-F41重组蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
3.一种权利要求1所述的K99-987P-F41重组蛋白的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
（1）根据GenBank已发表的产肠毒素大肠杆菌黏附素K99、987P、F41基因全序列（登录号分别为M35282.1、M35257.1、M21788.1）设计引物，以大肠杆菌C83912、大肠杆菌C83916、大肠杆菌C83919的基因组为模板，PCR分别扩增出目的片段；
（2）三个片段串联连入载体pET30a，构建表达载体pET30a-K99-987P-F41；
（3）表达载体pET30a-K99-987P-F41转化至大肠杆菌感受态细胞，IPTG诱导表达获得重组蛋白。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的引物序列如下，其中下划线为酶切位点：
P1：K99(F)：CGGGGTACCATGACTATTAACTTCAATGGCAAA（KpnI）（SEQ ID No.3）；
P2：K99(R)：CGCGGATCCTGAAGTAGTAAATACGCCAGC(BamHI)（SEQ ID No.4）；
P3：987P(F)：CGCGGATCCGGTGGTGGTGGTTCTGCTGAAAACAACACCAGCCAG(BamHI)（SEQ ID No.5）；
P4：987P(R)：CGAGCTCACTAGCAGTGACAGTACCGGC(SacI)（SEQ ID No.6）；
P5：F41(F)：CGAGCTCGGCGGTGGCGGCAGCGTATCTGGTTCAGTGATGGCT(SacI)（SEQ ID No.7）；
P6：F41(R)：AAGGAAAAAAGCGGCCGCACTGAGGTCATCCCAATTGTG(NotI)（SEQ ID No.8）。
5.权利要求1所述的K99-987P-F41重组蛋白在制备产肠毒素大肠杆菌疫苗中的应用。
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