[发明专利]β-胡萝卜素用于制备猪精液冷冻保护剂的应用有效

申请号：	201310216063.6	申请日：	2013-06-03
公开（公告）号：	CN103329889A	公开（公告）日：	2013-10-02
发明（设计）人：	李青旺;胡晓辰;江中良;胡靓华	申请（专利权）人：	西北农林科技大学
主分类号：	A01N1/02	分类号：	A01N1/02
代理公司：	西安恒泰知识产权代理事务所 61216	代理人：	李郑建
地址：	712100 陕***	国省代码：	陕西;61
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摘要：
搜索关键词：	胡萝卜素用于制备精液冷冻保护应用
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【权利要求书】：

1.β-胡萝卜素用于制备猪精液冷冻保护剂的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的猪精液冷冻保护剂由冷冻基础液、β-胡萝卜素、新鲜鸡蛋黄和甘油组成，其中，β-胡萝卜素在每100mL冷冻基础液中的添加量为1mg～2mg，新鲜鸡蛋黄在每100mL冷冻基础液中的添加量为20ml，然后取添加β-胡萝卜素和新鲜鸡蛋黄的冷冻基础液97ml，加入甘油3ml，即制成100mL猪精液冷冻保护剂。

所述每100mL的冷冻基础液中含有下列物质：

葡萄糖：1.1g，柠檬酸：1.48g，Tris：2.42g，青霉素钠：0.06g，硫酸链霉素：0.1g，余量为双蒸水。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的猪精液冷冻保护剂的制备包括下列步骤：

1）取配方量的葡萄糖、柠檬酸、Tris、青霉素钠、硫酸链霉素、溶于100ml双蒸水中，调节pH至6.21，渗透压286mosm/L，配制成冷冻基础液；

2）将步骤1）得到的冷冻基础液与20ml新鲜鸡蛋黄混匀，加入β-胡萝卜素1mg～2mg配制成Ⅰ液；

3）取步骤2）所配制的Ⅰ液97ml，加入甘油3ml，配制成100ml的Ⅱ液；

4）调节Ⅱ液pH值至6.0～7.5，渗透压286mosm/L，过滤灭菌，冷却至室温，得到猪精液冷冻保护剂，放入4℃冰箱中保存。

4.权利要求1所述的猪精液冷冻保护剂用于猪精液的冷冻保存方法，其特征在于，按下列步骤操作：

1）将新鲜精液离心，弃上清，加入等体积预温的冷冻稀释液，经纱布包裹后，在17℃恒温箱中平衡1h～2h；

2）将步骤1）平衡处理后的精液在17℃离心，弃上清，加入等温等体积I液，用纱布包裹后置于4℃冰箱中平衡1h～2h；

3）向步骤2）平衡处理后的精液中加入2倍体积等温Ⅱ液，调整精子密度为1.0×10⁹个/mL，4℃冰箱平衡1h～2h；

4）将步骤3）平衡处理后的精液吸入0.25ml细管内，封管，置于程序冷冻仪中，以1℃/min的速率从4℃缓慢降至-5℃，迅速移至液氮上方2cm～3cm熏蒸5min～10min，将细管投入液氮中保存。