[发明专利]单蓝A作为蛋白质预染色剂的用途

说明书

技术领域

本发明涉及单蓝A的新用途，尤其涉及单蓝A作为蛋白质预染色剂的新用途，属于单蓝A的应用领域。

技术领域

蛋白质组学(proteomics)是指以基因组编码的所有蛋白质为研究对象，从细胞水平及整体水平上研究蛋白质的组成及其变化规律，从而深入认识有机体的各种生理和病理。与传统蛋白质研究比较，蛋白质组学研究体现了全面性、整体性、高通量、大规模的特点。蛋白质组学的研究对于已完成基因组计划的理论预测的蛋白质组进行实证分析具有无法替代的重要作用，更重要的是蛋白质组分析无需依赖基因组研究，利用蛋白质研究有望从蛋白质的表达规律中找到序列分析难以处理的没有任何同源序列的“孤儿”基因的生物功能线索，进而揭示出它在整个功能网络的地位。蛋白质组学技术较为复杂，包括蛋白质分离、鉴定和信息分析三方面的内容。其中，凝胶电泳是与分离和鉴定相对应的核心技术之一。

自1959年Raymond和Weintraub首次使用聚丙烯酰胺作为电泳的支持介质，特别是20世纪60年代初Hjerten、Ornstein和Davis发表不连续电泳系统的基础工作以来，聚丙烯酰胺凝胶已成为目前生化实验最常用的支持介质，通过使用强阴离子SDS建立的SDS-PAGE技术已成为蛋白质分离、分析的常用方法。而在蛋白质组学试验中，蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳后的染色是一个十分重要的环节。常用的蛋白质染色方法有考马斯亮蓝染色、银染、荧光染色等。其中，考马斯亮蓝（CBBR和CBBG）染色是最常用的蛋白质染色方法，它具有成本低、操作便捷及质谱兼容性好等特点。但是，考马斯亮蓝染色总体染色灵敏度还是较低，约为几百纳克到几微克，染色时间较长，且凝胶背景偏深。银染是目前公认的除了放射性标记以外最为灵敏的蛋白质检测方法，可以在纳克级水平上检测蛋白。但是，银染通常会有相对低的重复性，造成很高的背景，并且由于加入的戊二醛和甲醛会对蛋白质进行修饰，导致银染的后续蛋白质组学研究的兼容性能普遍不佳。最近发展以来的荧光染色技术有很高的灵敏度和后续蛋白质组学研究兼容性。但由于荧光染料价格昂贵，切极易淬灭，还需要高端的仪器设备和特殊的分析软件，限制了该项技术在蛋白质组学领域的广泛应用。

Western-blot凝胶电泳是后续的蛋白质组学研究技术之一，其主要是用来识别、量化、并确定特定蛋白的大小。Western-blot是由Northern-blot和Southern-blot演化而来。在20世纪70年代后期，Towbin等人（1979年），使用聚丙烯酰胺-脲凝胶电泳分离蛋白质，并转移到硝酸纤维素膜上。Burnette（1981年）使用应用广泛的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离蛋白质，这最终导致了这种方法被称为Western印迹。它也被称为蛋白质印迹或免疫印迹，并迅速成为蛋白质组学研究的有力工具。Western-blot的方法是先用凝胶电泳分离天然或变性的蛋白质，然后将蛋白质转移到膜上，用未标记的特异性一抗与转移到膜上的抗原结合，再加入标记（放射素、生物素等标记）的二抗进行杂交检测，存在检测步骤多、成本高等缺陷，有待改进。

发明内容

本发明目的之一是提供单蓝A作为蛋白质预染色剂的新用途；

本发明目的之二是将用单蓝A染色蛋白质的方法进行了优化；

本发明目的之三是提供了一种改进的蛋白质检测方法；

本发明的目的之四是提供一种检测蛋白在细胞内分布情况的方法。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

针对现有的蛋白质预染色剂或染色方法所存在的各种缺陷，本发明人进行了锐意研究，最终发现，单蓝A可以作为蛋白质的预染色剂，用单蓝A作为蛋白质的预染色剂，染色步骤简便、染色所需时间短，15分钟内可完成染色、染色所需染料的量少，染色后的蛋白产物可以肉眼直观检测也可以在近红外激发光下被特殊扫描仪器检测，从而完成了本发明。

本发明首先提供了单蓝A作为蛋白质预染色剂的新用途；单蓝A可以在蛋白质的标记或检测等领域中有了多种用途，诸如：将标准量的蛋白质用单蓝A染色后制作预染蛋白质分子量标准品(marker)以及质谱分析前端的目的蛋白筛选和鉴定等。

进一步的，本发明提供了用单蓝A对蛋白质进行染色的方法，该方法包括：将单蓝A溶液与待染色的蛋白质溶液混合进行染色反应，加入染色优化剂室温静置后再加入染色终止剂终止染色反应。

其中，单蓝A与待染色的蛋白质的体积比优选为1:9。