[发明专利]用于抑制辣椒炭疽菌附着胞形成的枯草芽孢杆菌及其抗菌肽

说明书

技术领域

本发明属于植物病害生物防治领域，具体涉及一株抑制辣椒炭疽菌附着胞形成的枯草芽孢杆菌及应用。

背景技术

生物防治作为植物病害综合治理的重要内容，因与生态环境保护间的“相容性”及与农业可持续发展间的“统一性”，倍受世界各国的重视。生物防治在促进农林业生产发展和保护生态环境方面正发挥着日益重要的作用。

辣椒炭疽菌寄主范围广，可危害多种蔬菜、花卉、药用植物和大田作物的果实、茎、叶和幼果，引起烂果、枯枝、叶斑和死苗等症状，对农林生产造成严重危害。炭疽病的防治以选用抗病品种和化学防治为主。近年来，由于规模化栽培、抗病品种退化和化学防治易产生产品污染等原因，使该类病害处于较难防治的困境。因此，探索新的、有效的防治途径具有重要意义。

生物防治作为病害综合治理的一个重要发展方向，来源广泛的微生物，包括荧光假单胞菌、芽孢杆菌和酵母菌等已分别被应用于炭疽病的生物防治研究。芽孢杆菌因其具有易培养、所制备的菌剂抗逆性强、易保存等特点，已在病害生防上得到广泛应用。芽孢杆菌在作物炭疽病生防上的应用研究也有一些报道，但这些研究多局限于拮抗菌的分离、筛选、鉴定及其初步的生防作用研究。

附着胞的分化、形成和成熟是辣椒炭疽菌成功侵入寄主的前提。附着胞的形成是由来自植物表面的物理和（或）化学信号的识别而触发的，信号传导途径对于这类病害的发生可能非常重要。如果能阻断信号识别和传导过程,将可阻止附着胞的形成和病害的发展。Kim等的研究证实了这一点，他们发现在大肠杆菌内表达的辣椒酯酶能抑制胶胞炭疽菌和稻瘟病菌附着胞的形成，从而可控制病害的发生。其作用机理是该酶通过调制依赖环腺苷酸信号途径（cAMP-dependent signaling pathway）来调节附着胞形成（Kim Y S等. Inhibition of fungal appressorium formation by pepper (Capsicum annuum) esterase. MPMI, 2001,14(1):80-85）。从真菌的次生代谢产物中也发现了多种抑制炭疽菌等植物病原真菌侵染过程中孢子萌发和附着胞形成的生物活性物质，这些次生代谢产物可有效地阻断病害的侵入过程，对发展新型杀菌剂具有重要意义（Thines E等. Fungal secondary metabolites an inhibitors of infection-related morphogenesis in phytopathogenic fungi. Mycol. Res., 2004, 108(1):14-25.）。这些研究表明：以病菌侵入过程中的附着胞形成为作用靶标，筛选生物产生的活性物质阻断附着胞形成，从而阻止病害发生，对炭疽病的生物防治具有重要意义。在生态上，由于其作用靶标专一，对保护环境和微生物多样性也具有十分积极的意义。

而从枯草芽孢杆菌中筛选抑制辣椒炭疽菌附着胞形成的活性菌株，并应用于炭疽病生物防治的研究国内外未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于：提供一株能抑制辣椒炭疽菌附着胞形成的枯草芽孢杆菌，其可用于该菌引起的作物病害的生物防治。

本发明要解决的另一技术问题在于：提供一种枯草芽孢杆菌培养液，其可高效地抑制辣椒炭疽菌附着胞的形成。

本发明还要解决的技术问题在于：提供一种枯草芽孢杆菌的抗菌蛋白，其可高效地抑制辣椒炭疽菌附着胞的形成。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：提供一种用于抑制辣椒炭疽菌附着胞形成的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )C-D6，其保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院 中科院微生物研究所，邮编：100101，其保藏日期为：2011年10月14日；保藏编号为：CGMCC No.5345。

本发明提供枯草芽孢杆菌C-D6在抑制辣椒炭疽菌附着胞形成方面的应用。

本发明还提供一种细菌培养液，包含所述的枯草芽孢杆菌，其由以下步骤进行培养而成：

1）斜面活化培养的C-D6菌株；

2）摇瓶培养：将斜面活化培养的C-D6菌株接种到YPD液体培养基中进一步培养而得。

其中，所述培养步骤1中，是从枯草芽孢杆菌C-D6的保藏菌种斜面划线接种到NA平板，37℃培养20-24 h，挑起单菌落接种到NA试管斜面，37℃培养20-24 h后，备用。