[发明专利]区分大白菜TNL-E基因野生/突变状态的分子标记及其应用

权利要求书

1.一种鉴定大白菜TNL-E家族基因野生型和突变体的显性标记，其特征在于：该标记命名为ASM-TNL-E-01，该标记片段大小1367bp，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.用于鉴别权利要求1所述的显性标记的引物，其特征在于：

正向引物TNL1F：5'-TGAAACTTTCATTCAGCTTCAAGT-3'；

反向引物TNL1R：5'–TTGGGTTAGTTTTCAACTTTCACA-3'；如SEQ ID NO.2、3所示。

3.权利要求1所述的显性标记在大白菜种质资源鉴定和育种辅助选育中的应用。

4.权利要求2所述的引物在大白菜种质资源鉴定和育种辅助选育中的应用。

5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：具体应用方式为：利用SEQ ID NO.2、3所示的引物对待测个体的基因组DNA进行PCR扩增，检测扩增片段的有无，如果扩增出1367bp的条带，则基因组中含有野生型基因，不能扩出条带，则该基因发生了突变。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述PCR扩增的条件为：在20μl反应体系中，包含1×LA taq buffer；20ng的基因组DNA；0.4μM正反向引物；0.25mM dNTPmix；1个单位的LA taq。PCR循环条件：95℃预变性5分钟；接着是95℃变性30秒，57.5℃退火30秒，72℃延伸5分钟，35-38个循环，最后72℃延伸10分钟。