[发明专利]一种制备胸腺法新的固相合成新工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽固相合成领域，具体涉及一种制备胸腺法新的固相合成新工艺。 

背景技术

人胸腺肽α1（ Thymosin α1），又称胸腺28肽，是人胸腺产生的、存在于体内循环系统中的一种天然多肽。胸腺肽α1最初是从牛胸腺提取物第五组分中发现的N-乙酰化的酸性多肽，由28个氨基酸组成，分子量为3108。人胸腺肽α1的通用名为胸腺法新(Thymalfasin)。胸腺法新的生物活性比动物胸腺提取物（小牛胸腺肽）高上千倍，可促进T淋巴细胞在胸腺内增生及成熟，增加淋巴细胞分泌IL-2、α及r干扰素，增强IL-2受体的表达作用。此外，胸腺法新可增强NK细胞的数量和活性，通过对辅助T细胞、细胞毒淋巴细胞及NK细胞等免疫细胞的增殖作用，间接地杀死受病毒感染的肝细胞及肿瘤细胞。目前，胸腺法新作为免疫增强剂被广泛应用于重度感染、乙型肝炎、丙型肝炎、肿瘤免疫治疗和自身免疫性疾病。胸腺法新由SciClone Pharmaceuticals Inc.（美国赛生公司）开发上市，为冻干粉针注射剂，1995年前后进入中国。目前已经有30多个国家批准胸腺法新用于乙型和丙型肝炎的治疗及作为免疫增强剂供肿瘤病人使用，主要在亚洲国家使用。 

胸腺法新的化学结构式为： 

Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Lys-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn

1980年美国罗氏公司和美国洛克菲勒大学的研究者报道了（Int J Peptide Protein Res 1980, 15, l-4）本品采用Boc保护基的固相合成法，总收率不到7%，后经美国洛克菲勒大学的改进（Biochemistry 1980, 19, 3233-3238），纯化收率提高到34%。1985年罗氏公司的FELIX等报道了（Int J Peptide Protein Res 1985,26, 130-148.）本品的片段液相合成法，最后四步的收率为30%。1988年德国图宾根大学的Echner等报道了（Liebigs Ann Chem 1988, 1095-1097.）本品氨基采用Fmoc保护基/侧链采用t-Bu的固相合成法，粗品收率为76%，但经过2次柱层析纯化后，精制品收率很低。2009年西班牙生物医学研究所和瑞士Lonza公司的研究者（Biopolymers 2009, 92(6), 565-572），采用改进的Fmoc/t-Bu的固相合成法，C端的Asp主链羧基用t-Bu保护，侧链羧基连接到PEG氨基树脂上，即采用Fmoc-Asp-OtBu作为第一个引入的保护氨基酸。该方法的粗品纯度达到90%。