[发明专利]一种高纯度重组人BAFF的制备方法

权利要求书

1.一种经原核细胞适应性密码子优化的人BAFF基因，其用于表达134-285氨基酸的核苷酸序列如SEQ ID NO.01所示。

2.一种高纯度重组人BAFF的制备方法，该方法将优化后的人BAFF功能区的核苷酸序列载入原核表达载体，转入原核细胞进行培养后诱导表达，离心破碎后，对沉淀包涵体采用尿素逐步变性法除杂，获得高纯度的重组人BAFF蛋白；

其中，所述优化后的人BAFF核苷酸序列的功能区如SEQ ID NO.01所示。

3.根据权利要求2所述的一种高纯度重组人BAFF的制备方法，其特征在于：用于载入SEQ ID NO.01的原核表达载体为pET28a质粒，用于表达载体的原核细胞为DH5a受感态细胞。

4.根据权利要求3所述的一种高纯度重组人BAFF的制备方法，其特征在于：将含有pET28a-sBAFF的DH5a接种到LB液体培养基中预培养，然后接种到自动诱导培养基中，加入卡那霉素后振摇培养。

5.根据权利要求2所述的一种高纯度重组人BAFF的制备方法，其特征在于：所述尿素逐步变性法依次分别用尿素浓度分别为4M、6M、8M的变性缓冲液重悬离心洗脱1～2次，取上清液再依次用尿素浓度为4M、2M、1M、0.5M的复性缓冲液透析处理。

6.根据权利要求5所述的一种高纯度重组人BAFF的制备方法，其特征在于：所述变性缓冲液重悬离心后，加入蛋白质去垢剂连续吹打并高速离心。

7.根据权利要求5所述的一种高纯度重组人BAFF的制备方法，其特征在于：所述复性缓冲液还包括100mM NaH₂PO₄、100mM Tris、0.6mM Arg、1mM GSH、0.2mM GSSG。

8.根据权利要求5所述的一种高纯度重组人BAFF的制备方法，其特征在于：所述复性缓冲液透析12小时后，再12000rpm离心30分钟。

9.用于扩增SEQ ID NO.01的引物，如SEQ ID NO.03和SEQ ID NO.04所示。