[发明专利]一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法

权利要求书

1.一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）细胞液制备：将菌种接入216L培养基中培养，再将培养后获得的发酵液离心获得细胞，用缓冲液重悬、洗涤，配制成细胞液；

2）全细胞催化反应：在步骤1）得到的细胞液中，加入酮作为底物，再加入氨基供体和辅助底物，用于辅酶循环再生，利用细胞催化不对称还原胺化得到产物手性胺。

2.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤1）中，所述菌种为基尔假单胞菌(Pseudomonas kilonensis)，基尔假单胞菌(Pseudomonas kilonensis)已保藏于中国海洋微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为MCCC NO.1A06062。

3.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤1）中，所述将菌种接入216L培养基中培养的菌种接种量为1%；所述216L培养基的组成为10.0g/L蛋白胨,5.0g/L酵母粉,0.5g/L牛肉膏,0.5g/L柠檬酸钠,0.2g/L NH₄NO₃,1.0g/LNaAc，用海水配制。

4.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤1）中，所述培养的条件为：起始pH7.0，装液量体积分数为10%，培养温度30℃，摇床转速150rpm，培养时间72h。

5.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤1）中，所述离心采用冷冻离心机，离心的条件为4℃，10000rpm，15min，获得细胞。

6.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤1）中，所述用缓冲液重悬、洗涤的方法是弃上清液，缓冲液重悬，洗涤后离心，重复操作3次。

7.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤1）中，所述细胞液的浓度为0.025～100g/L；所述缓冲液可选自0.01～0.2mol/L的pH为7～13的Tris-盐酸、乙酸钠、碳酸钠、磷酸钾中的至少一种，优选pH9的Tris-盐酸缓冲液。

8.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤2）中，所述酮选自0.001～0.5mol/L的碳链长度2～10的脂肪族酮、芳香酮、羟基酮中的一种；所述氨基供体可选自0.002～1mol/L的丙氨酸、氨水、NH₄Cl、NH₄NO₃、氨基烷烃中的一种，优选氨水或NH₄Cl。

9.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤2）中，所述辅助底物选自0.001～1mol/L的葡萄糖、甘油、乙醇、甲酸、异丙醇、仲丁醇中的至少一种，优选葡萄糖、甘油中的至少一种。

10.如权利要求1所述一种海洋菌株催化不对称还原制备手性胺的方法，其特征在于在步骤2）中，所述利用细胞催化不对称还原胺化的条件是pH7～13，反应温度0～70℃，震荡速率100～300rpm，反应时间30～180h。