[发明专利]一种具自溶功能的重组菌及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种重组菌的制备方法，包括将E7裂解蛋白编码基因和目的蛋白编码基因导入出发细菌中，获得重组菌。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述E7裂解蛋白为序列表序列2所示蛋白；和/或，所述目的蛋白为淬灭酶；

所述淬灭酶具体可为序列表序列5所示的蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述E7裂解蛋白编码基因为序列表序列1的第52位至第195位所示基因；

和/或，所述目的蛋白编码基因为序列表序列4的第9位至第818位所示基因。

4.根据权利要求1—3中任一所述的方法，其特征在于：所述E7裂解蛋白编码基因和目的蛋白编码基因通过重组载体C导入所述出发菌中获得重组菌；所述重组载体C按照包括如下步骤的方法制备得到的：

在质粒pET-28a(+)T7启动子上游插入所述E7裂解蛋白编码基因表达盒获得重组载体B；在所述重组载体B的所述T7启动子下游的多克隆位点处插入所述目的蛋白编码基因，获得所述重组载体C；

所述E7裂解蛋白编码基因表达盒的启动子具体可为T7启动子；

所述重组载体C进一步具体可按照包括如下步骤的方法制备得到的：在质粒pET-28a(+)的XbaⅠ和XhoⅠ酶切位点之间插入序列表序列1的第17位至第195位核苷酸所示的DNA片段获得重组载体A，在所述重组载体A的SphⅠ和BglⅡ酶切位点之间插入序列表序列3的第16位至第398位核苷酸所示的DNA片段获得所述重组载体B，在所述重组载体B的EcoR I和Not I酶切位点之间插入序列表序列4的第9位至第815位核苷酸所示的DNA片段获得所述重组载体C。

5.根据权利要求1—4中任一所述的方法，其特征在于：所述出发菌为大肠杆菌(Escherichia coli)。

6.权利要求1—5中任一所述方法制备得到的重组菌。

7.权利要求6所述重组菌在制备所述目的蛋白中的应用。

8.一种制备目的蛋白的方法，包括如下步骤：将权利要求6所述重组菌用发酵培养基振荡培养至OD₆₀₀=1.0，然后加入IPTG至终浓度为0—1mmol/L，于30℃、180rpm、旋转半径为1.3cm的条件下继续震荡培养1—24小时，获得所述目的蛋白。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：当权利要求6所述重组菌的出发菌为大肠杆菌时，所述发酵培养基的溶剂为水，溶质及其终浓度分别为蛋白胨12g/L、酵母提取物24g/L、甘油4ml/L、KH₂PO₄0.231g/L、K₂HPO₄1.254g/L和葡萄糖5g/L。

10.权利要求4所述方法中的所述重组载体B。