[发明专利]一种查帕苦树素的提纯方法

说明书

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，涉及一种从扭旋堡树的干燥树皮中提取纯化查帕苦树素的方法。

背景技术

查帕苦树素（Chaparrin）是一种苦木素类化合物，主要来源于苦木科(Simaroubaceae)扭旋堡树Castela tortuosa Liemb的树皮。现代药理研究表明，查帕苦树素具有抗癌作用，在40mg/kg时对P388的T/C为145%；具有细胞毒活性，体外对鼻咽癌9KB细胞的ED50为6.5μg/mL；具有抗疟作用，对恶性疟原虫体外培养的IC50为0.180μg/mL(对照品氯喹为0.21μg/mL)，对D6株的IC50为0.25μg/mL,W2株为0.35μg/mL；具有抗阿米巴活性，对体外培养的阿米巴在加入本品100μM，48小时后有约100%的抑制率。

查帕苦树素分子式为C₂₀H₂₈O₇，分子量为380.44，结构式为：

。

经文献检索，尚无适用于高纯度查帕苦树素的提取纯化方法报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种查帕苦树素的提纯方法，该方法提率高、成本低，适合规模化生产。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种查帕苦树素的提纯方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）酶解：取原料扭旋堡树的干燥树皮，经粉碎处理，用酶溶液浸泡，水浴酶解2-5小时；

（2）提取：将上述酶解液过滤，取滤渣用5-8倍材重量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

（3）富集：将浸膏过大孔树脂柱，吸附完成后，醇水洗脱，收集洗脱液；

（4）纯化：将上述洗脱液减压回收乙醇，上硅胶柱（硅胶粒度为100-200目），乙酸乙酯-甲醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集查帕苦树素流分，减压浓缩，冷冻干燥得粗品；

（5）高速逆流色谱分离：粗品采用高速逆流色谱分离，以氯仿-甲醇-水为溶剂系统，比例为（2-5）:（5-9）:（4-7），收集目标成分，浓缩干燥即得高纯度查帕苦树素。

步骤（1）中所述酶可选纤维素酶、葡聚糖酶和果胶酶中的一种或几种，酶用量为2.5-3.5‰，pH为4-4.6，酶解温度为45-50℃。

步骤（2）中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为80-95%。

步骤（3）中所述大孔树脂选自AB-8、XDA-8、XAD-16或HZ806型中的一种。

步骤（3）中所述醇水洗脱为3-4BV20%-30%乙醇水溶液→4-6BV80%-90%乙醇水溶液。

步骤（4）中所述乙酸乙酯-甲醇体积比为3-11:1。

本发明采用酶解提取，有效成分更容易溶出，提高了提取率；采用采用大孔树脂柱粗分，比萃取法处理量大、含量高，更容易操作；采用高速逆流色谱分离，操作简单，制备周期短，产品无损失，可得到高含量的查帕苦树素，产品纯度较高。

具体实施方式：

实施例1：

取扭旋堡树的干燥树皮粉碎过60目筛，称取5kg，加15LpH4.2的纤维素酶水溶液（每kg生药加入2.2g纤维素酶）进行浸泡半小时，然后在42℃下水浴酶解3小时，过滤，取滤渣用5倍药材重量的80%乙醇超声提取0.5小时，提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入AB-8大孔吸附树脂柱，先取3BV20%乙醇洗脱杂质，再取4BV90%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇，上硅胶柱层析（硅胶粒度为100目），用乙酸乙酯-甲醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集查帕苦树素流分，减压浓缩，冷冻干燥得查帕苦树素粗品；取氯仿、甲醇、水，按比例2:5:4在分液漏斗中充分混合，静置，取下相注满高速逆流色谱柱，开启主机，设置转速950rpm，泵入上相做流动相，建立动态平衡后，调整流速为2.5ml/min，用流动相溶解粗提物，由进样阀进样，紫外检测器检测，收集目标成分，连续制备合并流分，得查帕苦树素1.3g，经HPLC检测，含量98.2%。

实施例2：