[发明专利]高效液相色谱法测定大黄鱼中碱性黄1含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱测定含量的方法，特别是一种高效液相色谱法测定大黄鱼中碱性黄1含量的方法。 

背景技术

碱性黄是一类染料，主要用于麻、纸、皮革、草编织品、人造丝等的染色，也用于印染棉织品。碱性黄1（硫黄素T）分子结构如下： 

我国食品添加剂使用卫生标准中规定合成色素不允许在任何海产品中添加使用，但受到利益的驱动，一些不法厂家为了追求高额利润，使用廉价的合成色素对海产品进行着色。近年来时有媒体报道商贩违法向所销售伪黄鱼、非新鲜黄鱼中添加黄色化工或食用色素用于鱼类染色。例如，商贩将碱性黄1融进水里，把黄鱼或其他外形类似黄鱼鱼类倒入进行浸泡，鱼被染上嫩黄色，以冒充新鲜黄鱼。长期过量食用此类，将对人体肾脏、肝脏造成损害。此类向黄鱼、伪黄鱼中添加非法添加色素行为属于新现象，目前，现有技术中均没有关于染色黄鱼中碱性黄1的检测及含量测定方法，因此，研究快速准确的检测出黄鱼中非法添加色素碱性黄1含量的方法具有重要的意义，为打劫不法商贩，确保人民的生命安全做出贡献。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种方法简便、可操作性强、快速检测且结果准确的高效液相色谱法测定大黄鱼中碱性黄1含量的方法。 

    本发明所要解决的技术问题是通过以下的技术方案来实现的。本发明是一种高效液相色谱法测定大黄鱼中碱性黄1含量的方法，其特点是，其步骤如下： 

（1）碱性黄1标准溶液制备：精确称取干燥至恒重的碱性黄1标准品各50mg，置于容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容至500mL，浓度为100μg/mL；临用前采用逐级稀释法将前述溶液配制成一系列浓度在1.0～50.0μg/mL范围内碱性黄1标准溶液；用高效液相色谱测定色素标准溶液的峰面积，绘制标准曲线，得到线性回归方程；

（2）大黄鱼供试溶液制备：将大黄鱼实体洗净，加入蒸馏水进行超声提取一次，提取时间为10-30分钟，提取温度为30℃；提取结束后经0.45μm微孔滤膜过滤后直接注入进样瓶，即得大黄鱼供试溶液； 

（3）测定：取20μL大黄鱼供试溶液进行高效液相色谱分析；

高效液相色谱条件为：

色谱柱：内径4.6mm × 柱长150mm×粒径5μm的 RX-C18；

流动相：A 为体积浓度为0.05% 的甲酸溶液，B 为甲醇；梯度洗脱，洗脱条件为：0～4min 内流动相A由70%均匀变化到50%，4～6min 内流动相A 50% 保持2min，6～10min 内流动相A由50%均匀变化到70%；

流速：1.0mL/min；进样量：20μL；柱温：30℃；检测波长：410 nm；

（4）根据步骤（1）的线性回归方程，计算得到大黄鱼中碱性黄1的含量。

本发明方法使用高效液相色谱（HPLC）法测定大黄鱼中碱性黄1的含量，具有提取及分析过程简便快速、回收率高、稳定性好、重复性好的特点，可快速、准确测定大黄鱼中碱性黄1含量，碱性黄1的加标回收率为98.92%， RSD为0.47%，有效测定和控制大黄鱼的产品质量。 

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应该理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用于限定本发明的保护范围。在实际应用中本领域技术人员根据本发明做出的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。 

实施例1，一种高效液相色谱法测定大黄鱼中碱性黄1含量的方法，其步骤如下： 

（1）碱性黄1标准溶液制备：精确称取干燥至恒重的碱性黄1标准品各50mg，置于容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容至500mL，浓度为100μg/mL；临用前采用逐级稀释法将前述溶液配制成一系列浓度在1.0～50.0μg/mL范围内碱性黄1标准溶液；用高效液相色谱测定色素标准溶液的峰面积，绘制标准曲线，得到线性回归方程；

（2）大黄鱼供试溶液制备：将大黄鱼实体洗净，加入蒸馏水进行超声提取一次，提取时间为10-30分钟，提取温度为30℃；提取结束后经0.45μm微孔滤膜过滤后直接注入进样瓶，即得大黄鱼供试溶液； 

（3）测定：取20μL大黄鱼供试溶液进行高效液相色谱分析；

高效液相色谱条件为：

色谱柱：内径4.6mm ×柱长150mm×粒径5μm的 RX-C18；