[发明专利]一种农杆菌介导培育转基因大豆的方法

权利要求书

1.培育转基因大豆的方法，通过农杆菌介导将目的DNA转入大豆细胞，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

1）在大豆种子萌发幼苗的子叶节分生组织处注射含有目的DNA的重组农杆菌的悬浮液后，将所述幼苗进行共培养；

2）将经步骤1）共培养的所述幼苗直接进行长苗培养，即得到具有根、茎和叶的转基因大豆植株。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述注射时的所述幼苗为种子萌发5—10天的幼苗。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述注射前，包括将所述幼苗的顶芽和侧芽去除的步骤。

4.根据权利要求1—3中任一所述的方法，其特征在于：所述重组农杆菌的悬浮液按照包括如下步骤的方法制备：将所述重组农杆菌悬浮于具有如下组成的液体培养基中形成所述重组农杆菌的悬浮液：溶剂为水，溶质及其在所述液体培养基中的终浓度分别为：1/10的B5基本培养基无机盐成分、B5基本培养基有机成分、蔗糖30g/L、2-(N-吗啉)乙磺酸3.9g/L、6-苄基腺嘌呤1.67mg/L、L-半胱氨酸400-1000mg/L、二硫苏糖醇154mg/L、硫代硫酸钠158mg/L、乙酰丁香酮0-300μmol/L、赤霉素0.1mg/L；

所述1/10的B5基本培养基无机盐成分为KNO₃250mg/L、CaCl₂113mg/L、MgSO₄122mg/L、(NH₄)₂SO₄13.4mg/L、KI0.075mg/L、H₃BO₄0.3mg/L、MnSO₄7mg/L、ZnSO₄1.15mg/L、Na₂MoO₄0.21mg/L、CoCl₂0.014mg/L、CuSO₄0.016mg/L、Na₂-EDTA3.73mg/L、FeSO₄15.2mg/L；

所述B5基本培养基有机成分为肌醇100mg/L、烟酸1mg/L、盐酸吡哆醇1mg/L、盐酸硫铵10mg/L。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：与所述液体培养基相比，所述重组农杆菌的悬浮液的OD₆₀₀值为0.4-1.0；所述重组农杆菌的悬浮液的注射量为每个所述幼苗20-100μL。

6.根据权利要求1—5中任一所述的方法，其特征在于：所述注射通过内径为0.06mm-1mm、外径为0.20mm—1.14mm的针头实现。

7.根据权利要求1—6中任一所述的方法，其特征在于：所述农杆菌为根癌农杆菌，具体可为根癌农杆菌EHA105。

8.根据权利要求1—7中任一所述的方法，其特征在于：所述共培养的条件为在温度25℃、黑暗条件下用水培养3天。