[发明专利]透明质酸‑抗肿瘤药偶联物及复合纳米粒组合物的制备和应用

权利要求书

1.具有肿瘤靶向性和多功能作用的透明质酸-抗肿瘤药偶联物及复合纳米粒组合物，其特征在于：该偶联物是利用抗肿瘤药物的活性基团羟基、氨基和羟基、氨基或羧基，通过连接臂形成抗肿瘤药-连接臂中间产物，透明质酸或其铵盐的羟基或羧基与中间产物反应，通过共价键结合而成透明质酸-抗肿瘤药偶联物；

所述透明质酸-抗肿瘤药偶联物与两亲性嵌段共聚物自组装为多功能复合纳米粒的结构示意图如下：

其中：Spacer为连接臂，AB、ABA、ABC为两亲性-聚酯嵌段共聚物，两亲性基团为聚乙二醇、单甲氧醚聚乙二醇、聚氨基酸；

透明质酸-抗肿瘤药偶联物与两亲性聚酯共聚物的组合重量为：1∶0.2～5，透明质酸与抗肿瘤药偶联的重量比为1∶0.05～1；

透明质酸与抗肿瘤药物的投料比为1∶20～1∶1，透明质酸取代度为3％～48％；优选摩尔比1∶5～1∶2，优选透明质酸取代度为12％～35％。

2.根据权利要求1所述透明质酸-抗肿瘤药偶联物，其特征在于，所述连接臂为二酸酐、二羧酸、末端具有氨基或羟基的羧酸；对于含有氨基或羧基的抗肿瘤药物，选择末端有羧基的连接臂以形成酯键或酰胺键连接，对于含有羧基的抗肿瘤药物，选择有羟基或伯氨基的连接臂以形成酯键或酰胺键；

所述连接臂选择氨基酸、琥珀酸酐、顺式乌头酸、顺势乌头酸酐、半琥珀酸酯；

所述氨基酸选择氨基酸为L-谷氨酸、L-丙氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-脯氨酸、L-赖氨酸或L-甘氨酸。

3.根据权利要求1所述透明质酸-抗肿瘤药偶联物，其特征在于所述抗肿瘤药物为紫杉醇、多烯紫杉醇、阿霉素、柔红霉素、表柔比星、喜树碱类、甲氨蝶呤、米托蒽醌或其衍生物。

4.根据权利要求1所述透明质酸-抗肿瘤药偶联物，其特征在于，所述透明质酸分子量为4500～580000，透明质酸或透明质酸经处理得铵盐选自透明质酸-四丁基氢氧化铵盐、透明质酸-十六烷基三甲基溴化铵盐、透明质酸-己二酸二酰肼。

5.权利要求1～4所述具有肿瘤靶向性和多功能的透明质酸-抗肿瘤药偶联物，其特征在于，制备过程包括如下步骤：

A.含有羟基的抗肿瘤药物-HA偶联物制备

(1)药物-连接臂中间产物：将含有羟基的抗肿瘤药物溶于有机溶媒中，以Fmoc-氨基酸、二酸酐或半酯为连接臂或以Boc-氨基酸、二酸酐为连接臂，加入催化剂和脱水剂进行Steglich反应，温度控制在0～30℃，磁力搅拌反应0.5～50h，加入惰性有机溶剂沉淀药物-连接臂产物，采用柱层析法分离纯化中间产物，即得活化药物-连接臂中间体；

透明质酸或透明质酸铵盐活化物：将透明质酸钠溶于0.1mol/L的盐酸溶液，酸化得透明质酸；将透明质酸加四丁基氢氧化铵或十六烷基三甲基溴化铵，反应0.25～4h，真空干燥2～4h，即得透明质酸铵盐活化物；

(2)将透明质酸或透明质酸铵盐活化物与药物-连接臂中间产物溶于有机溶剂，加催化剂和脱水剂，温度控制在10～50℃，磁力搅拌反应2～60h，将反应物置透析袋，去离子水透析处理3天除杂质，冷冻干燥，即得透明质酸-抗肿瘤药偶联物；或

B.含有氨基或羟基的抗肿瘤药物-HA偶联物制备

(1)将含有氨基或羟基的抗肿瘤药物溶于有机溶媒中，加入9-芴甲氧羰基氯，与氨基酸、二酸酐或半酯反应，加入催化剂和脱水剂，即得N-Fmoc-抗肿瘤药物中间体；

透明质酸或透明质酸铵盐活化物：将透明质酸钠溶于溶剂并酸化得透明质酸；将透明质酸加四丁基氢氧化铵或十六烷基三甲基溴化铵，反应0.25～6h，冷冻干燥，即得透明质酸铵盐活化物；

(2)将透明质酸衍生物活化物与药物-连接臂中间产物溶于有机溶剂，加入催化剂和脱水剂，加哌啶，温度控制在10～50℃，磁力搅拌反应2～60h。采用交联葡聚糖G-25纯化产物，冷冻干燥，即得透明质酸-抗肿瘤药偶联物；或

C.含有羧基的的抗肿瘤药物-HA偶联物制备

(1)将含有羧基的抗肿瘤药物溶于溶媒中，采用Boc-氨基酸或末端具有巯基的羧酸为连接臂，在催化剂和脱水剂的作用下进行Steglich反应，即得抗肿瘤药物-连接臂中间体；

将透明质酸钠溶于纯净水中，加0.05mol/L盐酸，得HA；加入己二酸二酰肼，加脱水剂反应0.25～6h，用0.01mol/LNaOH调节pH至中性，去离子水透析，冷冻干燥，即得透明质酸-己二酸二酰肼活化物；

(2)将透明质酸-己二酸二酰肼活化物与药物-连接臂中间产物溶于有机溶剂，在脱水剂和催化剂的作用进行反应，温度为10～50℃，磁力搅拌反应2～60h，将反应物置透析袋，去离子水透析3天除杂质，冷冻干燥，即得透明质酸-抗肿瘤药物偶联物。