[发明专利]一种基于分子马达、磁富集和双探针杂交技术的生物传感器构建及检测方法

权利要求书

1.一种检测生物大分子的方法，所述方法包括以下步骤：

a.将捕获探针与磁珠连接；

b.将检测探针与ATP分子马达连接；

c.将通过步骤a得到的连接有捕获探针的磁珠和通过步骤b得到的连接有检测探针的ATP分子马达与待测生物样品混合杂交；

d.在步骤c后对磁珠进行磁分离，将分离的磁珠加入到含有ADP的反应混合液中进行ATP合成反应；以及

e.在ATP合成反应结束后，取不含磁珠的反应上清在化学发光仪上进行读数；

其中所述捕获探针和所述检测探针分别与所检测的生物大分子的不同部位特异性结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物大分子是蛋白质，并且所述捕获探针和所述检测探针分别是针对所述蛋白质的两个不同表位的特异性抗体。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述蛋白质是C反应蛋白(CRP)，所述捕获探针和所述检测探针分别是CRP的单克隆抗体M86842M和M86284M。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物大分子是DNA，并且所述捕获探针和所述检测探针分别是与所述DNA正义链序列的5’端和3’端分别互补的一对核酸分子。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述生物大分子是RNA，并且所述捕获探针和所述检测探针分别是与所述RNA序列的5’端和3’端分别互补的一对核酸分子。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中在所述步骤a中，所述捕获探针标记有生物素，所述磁珠包被有链霉抗生物素，所述捕获探针与所述磁珠通过生物素与链霉抗生物素的相互作用而连接在一起。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中在所述步骤b中，所述检测探针标记有生物素，所述ATP分子马达标记有NeutrAvidin-PE-cap-biotin，所述检测探针与所述ATP分子马达通过生物素-NeutrAvidin-生物素系统连接在一起。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中在所述步骤d中，所述ATP合成反应在42℃进行。

9.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中在所述步骤c中，在进行混合杂交之前，对所述通过步骤a得到的连接有捕获探针的磁珠进行封闭处理。

10.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其中在所述步骤c中，所述杂交在37℃进行。

11.根据权利要求4或5中任一项所述的方法，其中在所述步骤c中，所述杂交在25-45℃进行。

12.一种用于检测生物大分子的试剂盒，所述试剂盒包括：

捕获探针；

磁珠；

检测探针；

ATP分子马达；和

含有ADP的反应混合液；

其中所述捕获探针和所述检测探针分别与所检测的生物大分子的不同部位特异性结合。