[发明专利]全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法

权利要求书

1.全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施：

步骤1、制备多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管；

步骤2、采用京尼平和乙醇混合溶液对经步骤1制得的多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管进行交联及消毒处理；

步骤3、种子细胞的培养与纯化；

步骤4、制备无菌的全氟三乙胺乳液；

步骤5、将经步骤4配制的全氟三乙胺乳液与经步骤3得到的种子细胞混合，并用双筒等量注射器注射到步骤2得到的消毒后的多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管内，得到本发明的全氟三丁胺乳液与种子细胞复合的神经导管。

2.根据权利要求1所述的全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法，其特征在于，所述步骤1具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、分别称取I型胶原蛋白和壳聚糖，I型胶原蛋白和壳聚糖的质量比为1～8:1；

步骤1.2、将经步骤1.1称取的I型胶原蛋白放入冰醋酸中，将壳聚糖放入配制的醋酸溶液中，待I型胶原蛋白和壳聚糖都充分溶解后形成两种悬浊液，混合两种悬浊液配制出I型胶原-壳聚糖凝胶状悬浊液；

步骤1.3、将经步骤1.2.4配制的I型胶原-壳聚糖凝胶状悬浊液倒入神经导管成形模具中，进行注模和冷淋固形处理；

步骤1.4、制备出多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管。

3.根据权利要求2所述的全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法，其特征在于，所述步骤1.2具体按照以下步骤实施：

步骤1.2.1、配制质量体积百分比浓度为140mg/ml醋酸溶液；

步骤1.2.2、按步骤1.1中称取的I型胶原蛋白的质量取冰醋酸，每克I型胶原蛋白加入10ml的冰醋酸溶液，将量取的冰醋酸与I型胶原蛋白混合，经22h～26h的溶解处理，制得I型胶原蛋白和冰醋酸的悬浊液；

按步骤1.1中称取的壳聚糖的质量取步骤1.2.1中配制的醋酸溶液，每克的壳聚糖加入37ml的冰醋酸溶液，将量取的醋酸溶液与壳聚糖混合，经22h～26h的溶解处理，制得壳聚糖和醋酸的悬浊液；

步骤1.2.3、将经步骤1.2.2得到的I型胶原蛋白和醋酸的悬浊液与壳聚糖和醋酸的悬浊液混合在一起，于2℃～6℃条件下，恒温搅拌处理70min～110min，得到混合悬浊液；

步骤1.2.4、将经步骤1.2.3得到的混合悬浊液先进行抽真空处理，之后再静置10h～14h，得到I型胶原-壳聚糖凝胶状悬浊液。

4.根据权利要求2所述的全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法，其特征在于，所述步骤1.3具体按照以下步骤实施：

步骤1.3.1、将经步骤1.2.4得到的I型胶原-壳聚糖凝胶状悬浊液注入神经导管成形模具中，以小铁夹固定神经导管成形模具的两端；

步骤1.3.2、在微型调速仪作用下，以垂钓的方式将神经导管成形模具顺轴向以1.2×10^-3m/s的速度缓慢浸入液氮中，对注入神经导管成形模具中的I型胶原-壳聚糖凝胶状悬浊液进行冷淋固形处理，待神经导管成形模具完全浸入液氮后，继续在液氮中保留10h～14h；

步骤1.3.3、经步骤1.3.2，将神经导管成形模具连同内部注入的I型胶原-壳聚糖凝胶状悬浊液一同转入-90℃～-70℃的冰箱中冷藏。

5.根据权利要求2所述的全氟三乙胺乳液与种子细胞复合的神经导管制备方法，其特征在于，所述步骤1.4具体按照以下步骤实施：

步骤1.4.1、将神经导管成形模具从-90℃～-70℃的冰箱取出，迅速去除神经导管成形模具两端的铁夹和铜管；

步骤1.4.2、经步骤1.4.1，将神经导管成形模具放置于预冷好的冷冻干燥机中冻干46h～50h，其中冷冻干燥机设置的预冷参数为：-60℃、100mtorr；

步骤1.4.3、将经步骤1.4.2冻干处理后的神经导管成形模先具放置于真空状态下并升温至0℃，保持5.5h～6.5h，之后再升温至20℃～24℃，保持30min～60min，解除真空状态，最后升至常温；

步骤1.4.4、经步骤1.4.2和步骤1.4.3冻干成形处理后，将神经导管从神经导管成形模具中取出，按不同的要求，裁剪成不同长度的神经导管，即制备得到多微孔可降解胶原-壳聚糖神经导管。