[发明专利]一种葡萄果实糖分HPLC-ELSD测定方法

权利要求书

1.一种葡萄果实糖分HPLC-ELSD测定方法，其特征在于，包括如下步骤： 

1）样品处理 

取大小均匀、色泽一致的洗净晾干的葡萄，用榨汁机打碎并混匀，迅速精确称取匀浆1.00g，用90%的乙醇定容到25mL容量瓶中，称重；然后用超声波提取20-40min，取出、室温冷却后，加90%的乙醇补充到之前定容25mL时液体的重量；将提取样品常温下8000-12000r/min离心15-30min，取上清液，经0.25μm滤膜过滤后用作供试样品； 

2）标准溶液的配制 

分别用超纯水配制浓度为0.1mg/mL、0.3mg/mL、0.6mg/mL、0.9mg/mL、1.2mg/mL、1.5mg/mL的葡萄糖、果糖和蔗糖的系列浓度标准工作液； 

3）色谱条件 

色谱柱为聚苯乙烯-二乙烯基苯键合的氨基糖柱；流动相为乙腈和水的混合物，其中，乙腈和水的体积比为70-80:30-20；流动相流速为1mL/min；柱温：30℃-35℃；检测器选用蒸发光散射检测器，检测池温度40℃-80℃，进样量10μL； 

4）线性相关性和精密度考察 

以步骤2）配制的0.1mg/mL、0.3mg/mL、0.6mg/mL、0.9mg/mL、1.2mg/mL、1.5mg/mL的葡萄糖、果糖、蔗糖的系列标准工作液，按步骤3）所述的色谱条件进样分析并计算，得标准曲线回归方程； 

吸取同一样品溶液，重复进样3-7次，按步骤3）所述的色谱条件进样分析，以果糖、葡萄糖和蔗糖峰面积计算精密度； 

5）稳定性检测 

吸取同一样品溶液，分别于室温下贮放0、2、4、6、8、16和24h后，按步骤3）所述的色谱条件进样分析，重复进样3-7次；测试果糖、葡萄糖和蔗糖峰面积并计算其相对标准偏差； 

6）样品回收率检测 

在制备好的多份同一葡萄样品提取液中，加入葡萄糖、果糖、蔗糖标样，另有1份葡萄样品提取液不加葡萄糖、果糖、蔗糖标样；按步骤1）所述的样品处理方法进行预处理，按步骤3）所述的色谱条件进样分析，连续进样5次，计算其回收率。 

2.根据权利要求1所述的葡萄果实糖分HPLC-ELSD测定方法，其特征在于，取 

样方法如下： 

葡萄谢花后20-25d起，在植株的东、西、南、北四个方向及上、中、下三个位置，采取中等大小、无病虫害的果实，每隔7-10d采一次样；果实采后迅速放入冰盒中，带 回实验室放入-80℃冰箱中备用。 

3.根据权利要求1所述的葡萄果实糖分HPLC-ELSD测定方法，其特征在于，将步骤2）中所述的标准溶液在进样前经0.25μm滤膜过滤，取滤液进样。 

4.根据权利要求1所述的葡萄果实糖分HPLC-ELSD测定方法，其特征在于，步骤3）中所述的乙腈和水的体积比为78:22。 

5.根据权利要求1所述的葡萄果实糖分HPLC-ELSD测定方法，其特征在于，步骤3）中所述的柱温为35℃。 

6.根据权利要求1所述的葡萄果实糖分HPLC-ELSD测定方法，其特征在于，步骤3）中所述的检测池温度50℃。