[发明专利]一种降低金线莲组培污染率的方法及其培养基配方

权利要求书

1.一种降低金线莲组培污染率的培养基配方，其特征在于所述的培养基配方为1/2MS、香蕉40～60g/L、活性炭0.8～1.2g/L、NAA0.8～1.2mg/L、6-BA0.4～0.8mg/L、蔗糖22～30g/L、琼脂粉5.5～6.5g/L、洋葱40～60g/L、螃蟹壳粉10～20g/L。

2.如权利要求1所述的一种降低金线莲组培污染率的培养基配方，其特征在于所述的培养基配方为1/2MS、香蕉50g/L、活性炭1.0g/L、NAA1.0mg/L、6-BA0.6mg/L、蔗糖26g/L、琼脂粉6.0g/L、洋葱50g/L、螃蟹壳粉15g/L。

3.一种利用权利要求1或2所述的培养基配方降低金线莲组培污染率的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）接种室消毒：每月用艾叶和雷公藤对接种室薰蒸一次进行灭菌消毒；每周用臭氧发生器对接种室进行一次灭菌消毒；

2）培养室消毒：每月用艾叶和雷公藤对培养室薰蒸一次进行灭菌消毒；每月用臭氧发生器对培养室进行一次灭菌消毒；

3）培养基配制：以1/2MS为基础培养基，按照配方进行配制，混匀后将培养基的PH值调节至5.8～6.0；将配制好的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热分装于干净的培养瓶中后加盖；

4）培养基和接种器具灭菌：采用高压蒸汽法对培养基和接种器具进行灭菌。

5）外植体接种：

当采用自然生长的金线莲植株作为外植体时，用自来水洗净金线莲，转入70%乙醇漂洗30s，再用0.1%升汞灭菌10min，无菌水反复冲洗5～6次，沥干水分，剪成带1个节茎段，接种于准备好的培养基上；

当采用金线莲组培无菌苗作为外植体时，将金线莲剪成带1个节茎段，接种于准备好的培养基上；

6）组培苗培养：将接种好的培养瓶移入培养室，培养条件：温度24±2℃，光照时间12h/d，光照强度1800～2000lx，培养时间四个月。

4.根据权利要求3所述的一种降低金线莲组培污染率的方法，其特征在于：接种前，接种室和超净工作台开紫外灯照射消毒30min，然后打开超净工作台吹风20min，用新洁尔灭擦拭台面后使用；污染的培养瓶须经过高温高压灭菌后方可使用。

5.根据权利要求4所述的一种降低金线莲组培污染率的方法，其特征在于：所述的培养室应定期打扫，每天喷洒75%的酒精除尘，阴雨天开空调除湿，以保持干净和室内空气干燥；发现培养室有污染的培养瓶应立即灭菌处理，以防扩散。

6.根据权利要求5所述的一种降低金线莲组培污染率的方法，其特征在于：所述步骤4）灭菌时要保证灭菌锅内部清洁，内部的冷气排尽，装填的灭菌物不能堆放过满，保持灭菌锅温度在121℃、105kPa、20min；培养基灭菌后，先放入缓冲间，抽取样品放在培养室培养2～3d，若培养基表面和内部均无任何细菌痕迹和真菌菌斑，方可使用；刀、剪、镊子等金属用具在接种前用75%酒精棉球擦拭，再在带有石英砂的消毒器内高温消毒5～10min，冷却后使用。