[发明专利]一种检测水体中井冈霉素A残留的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用强酸性阳离子交换树脂检测水体中井冈霉素A残留的方法，属于水体中农药残留分析领域。

背景技术

井冈霉素是通过微生物发酵生产的一种多组分的混合物，其有效成分为A、B、C、D、E、F、G，其中井冈霉素A是其主要的有效成分，一般也是以井冈霉素A的百分含量来表示其浓度。井冈霉素是一种低毒杀菌剂，具有较强的内吸性，易被菌体细胞吸收并在其内迅速传导，干扰和抑制菌体细胞生长和发育。主要用于防治水稻纹枯病、小麦菌核病，玉米大斑病，蔬菜立枯病，棉花、豆类立枯病、白娟病，人参立枯病等。井冈霉素纯品为白色无定型粉末，溶于水、二甲基甲酰胺，微溶于乙醇，不溶于丙酮、苯、乙酸乙酯等有机溶剂，吸湿性强，在室温pH3-9水溶液中稳定。

井冈霉素A的pK_a为6.0，其分子结构中含有1个亚氨基，可以用阳离子交换树脂进行吸附，而选择合适的树脂是应用离子交换法的关键。杨志钧等 (离子交换与吸附, 2005, 21(6): 551-555) 在比较了5种大孔树脂与常用的001×4凝胶树脂对井冈霉素的静态和动态吸附性能的基础上，采用正交试验筛选出具有较大吸附量的大孔强酸性阳离子树脂HD-8，但要求上柱液浓度必须为10 mg/mL左右。公开号为CN101525650A的中国专利公开了一种利用大孔弱酸吸附树脂一步法提取井冈霉素发酵液中井冈霉素的方法，该方法将井冈霉素发酵液趁热过滤，调节pH＝7~9，冷却到室温，用大孔弱酸吸附树脂进行吸附，去离子水洗至中性，然后用1.0~2.0 mol/L氨水解吸，减压浓缩，再经活性碳脱色后，在40~70℃真空喷雾干燥得井冈霉素A含量为65％左右的井冈霉素粉末。

钟世华等 (湖南师范大学自然科学报, 2010, 33(1): 71-74) 采用D151树脂一步法提取了井冈霉素,但所用井冈霉素发酵液中井冈霉素含量为31.265 mg/mL。专利号为CN101139374 A的中国本发明专利提供了一种从井冈霉素发酵液中井冈霉素的提取方法：将井冈霉素发酵液加热至100~120℃，保温5~60分钟，过滤，取滤液经过超大网阳离子吸附树脂进行离子交换和吸附，然后用0.1~1.5 mol/L的氨水溶液作为洗脱剂，对吸附有井冈霉素的超大网阳离子吸附树脂洗脱，收集洗脱液经减压蒸发除氨气得含有井冈霉素A的粗品，将粗品进行后处理即制得井冈霉素。郑裕国等 (农药, 1996, 35(11): 9-10) 用三步离子交换方法吸附提取了发酵液中的井冈霉素，收率为70％左右，含量达90％以上，适用于井冈霉素产品的后期开发利用。上述文献资料所涉及的都是从井冈霉素发酵液中提取井冈霉素的方法，发酵液中井冈霉素含量达2~3%。而稻田或其它水体中的井冈霉素残留量极低，一般在0.01%以下，若采用以上方法无法对残留的井冈霉素进行准确检测，为此，需要一种对水体中微量或痕量井冈霉素进行富集、测定的方法。

发明内容

本发明的目的是在于提供一种利用强酸性阳离子交换树脂检测水体中井冈霉素A残留的方法。

本发明提供了一种利用强酸性阳离子交换树脂检测水体中井冈霉素A残留的方法，具体操作步骤如下：

(1) 装柱：量取30 mL经过预处理的阳离子交换树脂于玻璃层析柱中，以60 mL pH 3.5的磷酸盐缓冲溶液平衡；

(2) 富集：取200.0 mL含有0.05~1.00 mg/L井冈霉素A的水样，调节pH后，上样于层析柱中进行吸附富集；

(3) 去杂：分别用pH 3.5的磷酸盐缓冲溶液和乙醇淋洗去除杂质；

(4) 洗脱：用60~175 mL 洗脱剂进行洗脱；

(5) 浓缩：将步骤(4)的洗脱液在60℃下旋蒸近干，再用氮气或空气吹干，定量加入2.00 mL Na₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液 (pH7.0) 超声溶解；

(6) 检测：将样品溶液进行液相色谱测定，HPLC色谱操作条件：LC-10Atvp型高效液相色谱仪 (日本岛津公司生产，带液相色谱工作站和紫外检测器)，色谱柱：AQ-C₁₈柱 (4.6×250 mm，5μm)，流动相：甲醇：Na₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲溶液 (pH7.0)＝2：98 (V：V)， 流速：0.6 mL/min，检测波长：210 nm，柱温：35℃，进样量：20 μL。