[发明专利]胃乃安片的质量检测方法

权利要求书

1.一种胃乃安片的质量检测方法，其特征在于：所述检测方法采用以下鉴别和含量测定项目中的一项或多项：

（1）黄芪的薄层鉴别：

a制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，合并上层乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作为供试品溶液；

b制备黄芪对照药材溶液：取黄芪对照药材1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，合并上层乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作为黄芪对照药材溶液；

c制备对照品溶液：取芒柄花素对照品、毛蕊异黄酮对照品、芒柄花苷对照品及毛蕊异黄酮苷对照品，分别加甲醇制成每1ml甲醇含0.8-1.2mg上述对照品的甲醇溶液，作为对照品溶液；

d检测：取步骤a所述供试品溶液、步骤b所述黄芪对照药材溶液各9-10μl和步骤c所述对照品溶液1.8-2.2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比19-21︰19-21︰8-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；再喷以0.08-0.12%的1，1-二苯基-2-三硝基苯肼无水乙醇溶液，晾干，置日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（2）黄芪、红参和三七的薄层鉴别，步骤如下：

a制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，合并下层水液，用水饱和正丁醇振摇提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2-3次，每次28-32ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作为供试品溶液；

b制备对照药材溶液：取黄芪对照药材1.8-2.2g，加甲醇48-52ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加水18-22ml使溶解，再用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，合并下层水液，用水饱和正丁醇振摇提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2-3次，每次28-32ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，作为黄芪对照药材溶液；另取红参对照药材0.45-0.55g与三七对照药材0.65-0.75g，分别加水90-110ml，煎煮55-65min，过滤，滤液用乙酸乙酯提取3-4次，每次28-32ml，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和正丁醇振摇提取3-4次，每次28-32ml，合并正丁醇液，后用氨试液洗涤2-3次，每次28-32ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇0.45-0.55ml使溶解，分别制得红参对照药材溶液和三七对照药材溶液；

c制备对照品混合溶液：取黄芪甲苷对照品、人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Rb₁对照品及三七皂苷R₁对照品，加甲醇制成每1ml甲醇各含0.8-1.2mg的上述对照品的混合溶液，作为对照品混合溶液；

d检测：取步骤a所述供试品溶液与步骤c所述对照品混合溶液各1.8-2.2μl、步骤b所述黄芪对照药材溶液8-12μl、红参对照药材溶液5-7μl和三七对照药材溶液0.8-1.2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比3.5-4.5:1:4.5-5.5的正丁醇-乙酸乙酯-稀氨的上层溶液为展开剂，置于浓氨试液预饱和20分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以9-11%硫酸乙醇溶液，在100-110℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；

（3）人工牛黄的薄层鉴别：

a制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取0.18-0.22g，加甲醇18-22ml，超声处理，过滤，蒸干滤液，残渣加甲醇0.8-1.2ml使溶解，作为供试品溶液；

b制备对照药材溶液：取人工牛黄对照药材8-12mg，加甲醇1.5-2.5ml，超声处理，离心，取上清液作为对照药材溶液；

c制备对照品溶液：取胆酸对照品、猪去氧胆酸对照品，分别加甲醇制成每1ml甲醇中含0.8-1.2mg上述对照品的溶液，作为胆酸对照品溶液和猪去氧胆酸对照品溶液；

d检测：取步骤a所述供试品溶液、步骤b所述对照药材溶液和步骤c所述胆酸对照品溶液和猪去氧胆酸对照品溶液各0.8-1.2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18-22:23-27:2.5-3.5:1.5-2.5的环己烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以9-11%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

（4）胃乃安片的高效液相色谱定性鉴别，包括如下步骤：

a色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，0.1%甲酸为流动相B，梯度洗脱，PDA/ELSD串联检测；所述PDA的检测波长为260nm；ELSD参数为：漂移管温度：60℃，载气流速：35psi，增益值：200；理论板数按毛蕊异黄酮苷峰和人参皂苷Rb₁峰计算均应不低于5000；所述梯度洗脱为：0-32min，5%→18%乙腈；32-38min，18%→22%乙腈；38-58min，22%乙腈；58-70min，22%→32%乙腈；70-84min，32%→34%乙腈；84-96min，34%乙腈；96-102min，34%→40%乙腈；102-125min，40%→67%乙腈；

b制备参照物溶液：取毛蕊异黄酮苷与人参皂苷Rb₁对照品，分别加甲醇制成浓度为38-42μg/ml的毛蕊异黄酮苷甲醇溶液和浓度为0.13-0.17mg/ml的人参皂苷Rb₁甲醇溶液；

c制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取粉末0.8-1.2g，加甲醇48-52ml，超声处理，放至室温后，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，取滤液23-27ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；

d检测：在步骤a所述色谱条件下进行检测；

（5）胃乃安片的高效液相色谱定量测定，包括如下步骤：

a色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈为流动相A，0.1%甲酸为流动相B，梯度洗脱，用PDA/ELSD串联检测；所述PDA的检测波长为260nm；ELSD参数为：漂移管温度：60℃，载气流速：35psi，增益值：200；理论板数按毛蕊异黄酮苷峰和人参皂苷Rb₁峰计算均应不低于5000；所述梯度洗脱为：0～32min：5%→18%乙腈；32～38min：18%→22%乙腈；38～58min：22%乙腈；58～70min：22%→32%乙腈；70～84min：32%→34%乙腈；84～96min：34%乙腈；96～102min：34%→40%乙腈；102～125min：40%→67%乙腈；

b制备混合对照品溶液：取毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、三七皂苷R₁、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁、胆酸与猪去氧胆酸对照品，加甲醇制成每1ml甲醇含毛蕊异黄酮苷38-42μg、芒柄花苷7-9μg、毛蕊异黄酮18-22μg、芒柄花素5-7μg、三七皂苷R₁0.13-0.17mg、人参皂苷Rg₁0.28-0.32mg、人参皂苷Re38-42μg、人参皂苷Rb₁0.13-0.17mg、胆酸0.45-0.55mg、猪去氧胆酸0.35-0.45mg的混合对照品溶液；

c制备供试品溶液：将胃乃安片研细，取粉末0.8-1.2g，加甲醇48-52ml，超声处理，放至室温后，用甲醇补足减少的重量，摇匀，过滤，取滤液23-27ml，蒸干，残渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；

d检测：在步骤a所述的色谱条件下，吸取对照品溶液5μ1、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，其中PDA检测以外标一点法计算，ELSD检测以外标两点法对数方程计算，即得；

（6）黄芪甲苷的高效液相色谱定量测定：

a色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为30︰70的乙腈-水为流动相；蒸发光散射检测器检测；理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于5000；

b对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品加甲醇制成浓度为0.45-0.55mg/ml的黄芪甲苷对照品甲醇溶液；

c供试品溶液的制备：将胃乃安片研细，取粉末1.3-1.7g，加甲醇48-52ml，超声处理，放至室温后，用甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取滤液23-27ml，蒸干，残渣加水18-22ml使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3-4次，每次38-42ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2-3次，每次38-42ml，弃去氨液，将正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，用甲醇于5ml容量瓶中定容，即得；

d检测：吸取对照品溶液5μl、15μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。